小鼠孤雌胚胎干细胞建系和鉴定

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1、上海第二医科大学2001级硕士研究生论文小鼠孤雌胚胎干细胞建系和鉴定中文摘要胚胎干细胞是一种从哺乳动物囊胚中获得的全能细胞。胚胎干细胞能在体外特定条件下无疆地自我更薪并能分化成体皮任四一种缨胞，因此它在基础研究领域和临床治疗领域都有重要的研究价值。首先。胚胎干细胞可用于研究早期发育过程中发生的细胞和分子事件。其次，胚胎干细胞可用于药物筛选和毒物筛查。最后，也是最吸引人的是胚胎干细胞将来可能用于细胞治疗取代受损组织，经过基因工程改造的胚胎干细胞在整个生命科学和医学领域也将产生深远的影响。胚胎干细胞有三种来源：一是从正常受精卵

2、形成的囊胚中获得；二是从通过核转移途径得到的囊胚中获得；三是从孤雌发育形成的囊胚中获得。第三种途径产生的胚胎干细胞称为孤雌胚胎干细胞。孤雌胚胎干细胞作为一种特殊的胚胎干细胞也有重要的基础研究和应用价值。首先，由受精卯发育成囊胚后建立的普通胚胎干细胞系由于主要组织相容复合物(MHC)在不同个体之间存在显著差异将可能导致移植后免疫排斥。而孤雌胚胎干细胞的MHC等位基因是纯合子(也可能存在少量的同源染色体交换)，因此从理论上将大大降低免疫排斥的可能性。其次，已有文献报道哺乳动物孤雌胚胎干细胞具有向三个胚层细胞分化的能力，因此孤雌

3、胚胎千缅胞将来也可以作为缅胞治疗的一个来源。最后，印迹基霞在胚胎于细胞中的表达情况很复杂，孤雌胚胎干细胞可作为一个有力的研究工具对印迹基因的表达和功能做进一步研究。研究目的：建立小鼠孤雌胚胎干细胞系并对其进行全面鉴定。材料与方法：首先用化学试剂激活小鼠次级卵母细胞进行孤雌发育，将体外培养获得的囊胚接种到饲养层细胞上进行连续传代培养，获得足够多的细胞后进行冻存和鉴定。胚胎干细胞的鉴定主要有两个指标：一是是否能在体外长期增殖且保持不分化状态；二是是否具有全能性，即能否在体内和体外分化成来源于三个胚层的细胞。第一个指标的蕤定可通

4、过将孤雌胚胎干细胞进行连续体外传代培养并观察其生长状态，同时对早期和传代较晚的孤雌胚胎干细胞进行未分化分子标志鉴定。第二个指标可以通过鉴定孤雌胚胎干细胞是否能在体内形成畸胎瘤以及能否在体外自发或诱导分化成三个胚层的细胞来完成。上海第二医科大学2001级硕士研究生论文结果：建立了三个小鼠孤雌胚胎干细胞系。三个系均在体外连续传代50次以上且保持未分化状态。小鼠孤雌胚胎干细胞具有与普通小鼠胚胎干细胞相同的形态学特征：都呈鸟巢状生长，细胞核浆比大，有明显的核仁，细胞之间的界限不清。经过鉴定证实小鼠孤雌胚胎干细胞来源于次级卵母细胞，

5、能在体内和体外分化为三个胚层来源的细胞。小鼠孤雌胚胎干细胞的核型是40，XX。结论：我们建立的三个小鼠孤雌胚胎干细胞系具有在体外长期增殖且保持不分化的能力，具有多能性。关键词：孤雌生殖胚胎干细胞圭塑兰三墨![盔堂!!!!丝堡±堕塞皇笙塞英文摘要AbstractEmbryonicstemcellsarepluripotentcelllinesderivedfromtheinnercellmassofthemammalianblastocyst．Theyhaveabilitiestoself-renewindefinitely

6、incultureandtodevelopintoanycelltypesinadultbody．Therefore，thesecellshaveimportantvalueinbasicresearchandinregenerativemedicine．First，embryonicstemcellsprovidewithusaidealcellmodeltostudycellularandmoleculareventsinearlymammaliandevelopment；Second，embryonicstemcel

7、lscouldbeusedtotestcandidatetherapeuticdrugsandscreenpotentialtoxins．Finally,themost。excitedaspectistheirpotentialtoserveasrenewablesourcesoffunctionaltissue。specificcells．Geneticmanipulationofembryonicstemcellscouldbringfar-reachingaffectonlifescienceandmediciner

8、ealm．Embryonicstemcellscanbederivedfromthreekindsofembryos：Oneisnormallyfertilizedeggs；Secondisbiastoeystderivedfromnucleartransfer．Thirdisparthenogenet