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《新生CD-1小鼠雌性生殖干细胞的建系及生物学特征.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、新生CD-1小鼠雌性生殖干细胞的建系及生物学特征毕海委1，吴 际1，21上海交通大学Bio-X研究院，遗传发育与精神神经疾病教育部重点实验室，上海市 2002402宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室，宁夏回族自治区银川市 750004EstablishmentandcharacterizationofCD-1neonatalfemalegermlinestemcelllinesBiHai-wei1,WuJi1,21KeyLaboratoryfortheGeneticsofDevelopmental&Neuropsychiatric
2、Disorders(MinistryofEducation),Bio-XInstitutes,ShanghaiJiaoTongUniversity,Shanghai200240,China2KeyLaboratoryofFertilityPreservationandMaintenanceofMinistryofEducation,NingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750004,NingxiaHuiAutonomousRegion,China摘要 背景：传统观点认为雌性哺乳动物出生后不再产生新的卵母细胞
3、，近年来多项研究表明出生后哺乳动物卵巢中存在能再生卵子的雌性生殖干细胞。目的：从新生CD-1小鼠卵巢中分离、纯化雌性生殖干细胞并建系及进行生物学特征研究。 方法：通过两步酶消化法和免疫磁珠分选从新生CD-1小鼠卵巢中分离与纯化雌性生殖干细胞并体外长期培养，然后通过RT-PCR、细胞免疫荧光化学和核型分析鉴定其生物学特征。结果与结论：从3-5d龄CD-1小鼠卵巢中分离出雌性生殖干细胞并建立细胞系，目前已在体外长期培养15个月，共传代70多次。该细胞系表达Mvh，Dazl，Oct-4，Stella，Blimp1，Fragilis等生殖细胞
4、标志物，同时通过Fragilis和BrdU的双免疫荧光实验证实了其增殖活性和生殖细胞特性；核型分析发现该细胞系也具有正常的二倍体核型。因此CD-1小鼠卵巢中存在具有有丝分裂活性和正常的核型的雌性生殖干细胞。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程全文链接：关键词 ： 干细胞； 培养； 雌性生殖干细胞； 分离； 纯化； 鉴定； 生物学特征； 国家自然科学基金； Abstract：BACKGROUND:In traditiona
5、lview,thegermcellsinmammalovarieswereconsideredtolosethecapacityofself-renewafterbirth.However,recentstudieshaveshowedtheexistenceoffemalegermlinestemcells(FGSCs)whichtaketheresponsibilityforregeneratingoocytesintheovariesofpostnatalmammals. OBJECTIVE: ToestablishtheFGS
6、ClineandtoexplorethebiologicalcharacterizationoftheFGSClinefromneonatalCD-1mouseovaries.METHODS: Usingtwo-stepenzymaticdigestionandimmunomagneticpurification,Fragilis-positivecellswereisolatedfromneonatalCD-1miceovariesandsubjectedtolong-termculture.Thentheirbiologicalc
7、haracteristicswerestudieswithRT-PCR,fluorescentimmunocytochemistryandcytogeneticanalysis.RESULTSANDCONCLUSION: FGSCsfromneonatalCD-1miceaged3-5dayswereisolatedandlong-termculturedfor70passagestoestablishacellline.ThiscelllineexpressedMvh,Dazl,Oct-4,Stella,Blimp1,Fragili
8、s,andwasproventobemitoticallyactivegermcellsbyBrdU/Fragilisdualimmunofluorescenceanalysis.Moreover,cytogenetic
