小鼠ntes（核移植胚胎干细胞）系的建立和鉴定人es（胚胎干细胞）系建立的探索

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1、小鼠ntES(核移植胚胎干细胞)系的建立与鉴定人ES(胚胎十细胞)系建立的探索小鼠ntES(核移植胚胎干细胞)系的建立与鉴定人ES(胚胎干细胞)系建立的探索硕士研究生：蒋永华指导老师：孙筱放教授中文摘要治疗性克隆(therapeuticcloning)是胚胎干细胞技术(embryonicstemcell，EScell)与核移植(nucleartransfer)技术的结合产生的不以生殖为目的新技术，该项技术使许多目前医学上没有有效治疗方案的疾病重新获得治愈的可能。本研究拟先通过小鼠ES细胞的培养及核移植显微操作技术的练习，建立小鼠核移植后胚胎干细胞(nucleartransfer

2、embryonicstemcell．ntEScell)，再进一步探索人的ES细胞的培养及鉴定，来源于IVF低质量废弃胚胎的人ES细胞系建系，为将来治疗性克隆试验的开展建立试验基础。研究内容包括一下两个部分：第一部分小鼠ntES细胞的建立及鉴定第一节不同品系小鼠ES细胞系的建立与鉴定研究目的l探索建立小鼠ES细胞建系的有效方法。2对建立的Es细胞系进行鉴定，嵌合体小鼠的获得。方法1建立小鼠的Es培养体系1．1MEF饲养层的制备取孕12．5～13．5d的I(M孕胎鼠，制备MEF，1011g／ml丝裂霉素C作用2—3小时后，重新接种制作饲养层。1_2小鼠囊胚的获取采用两种方式获取囊胚

3、：(1)dpc3．5-4．5冲洗子宫获取囊胚。(2)dpc2．5天冲洗输卵管收集卵裂球，卵裂球体外培养获取囊胚。1．3ICM原代培养!：垦!生!!堡堡焦墅堕王塑堕!墨堕垄塞皇鳖塞△坠!墅堕王塑堕!墨堡兰塑塑室——TheestablishmantandcharacterizatiOnofthemousentESceUlines，ToinvestigatetheestablishmantofhEScelllines．M．Dcalldidate：YonghuaJiall吕Supervisor：Pr0￡)(iao‰gSlHlTheSecondpeOple’shospi协lofGu鲫gz

4、hou，G哪gzlloumedicalco¨ageAbstractThereantwopartsinourstudy：PartITheest叠bHshm—ntaⅡdcharacteI·izationofthemousentESsectionsIIsoIationandcunivationembryonicstemCeULinesDeriVedfhmVhriousMOusestrain‰【objectiVeI1．Toincre豁emeemciencyofmousee玎心ryonicstemceU(ES)linesdcriVedf如mvariousmousestra协s．2．Det

5、e彻inetllech甜acterizationsofmEScelllines．【method】1Prep啦tionoffeederlayers．MitoticallyiImctivatedMEFwereusedasfeeder·2Mouswere瑚1domlydividedintocontrolgr01lportestgr01lp，controlgroupblastocystobtained丘Dm3．5dayspost-cotium(dpc)superoⅦlatcdmouse，andtranslatcimoESmedi啪cultureonfeeder．Testgrouphar

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7、echmcterizationsofmEScelllines．【Resunsl1Harves衄gembryosattheearIymoruIas诅ge舶m2．5dpcmouse，ma州ngtobIastocystsbyin“troclllt眦e，cangatllermoreblastocyststllenf幻m3·5dpcsupemⅦlatedmouse．2ICMpickomomonewlypreparedMEFfeederlaycrs，andcultucroVcrnight，thenVn小