昆明白小鼠胚胎干细胞建系方法与相关特性的研究

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1、摘要胚胎干细胞(EScell)是具有多向分化能力的全能性细胞。研究和利用ES细胞是当前生物工程领域的核心问题之一。至今建立的小鼠ES细胞系大多来源于129，C57BL／6J，BALA／C等品系，有关昆明白小鼠ES细胞建系研究较少。作为国内普遍使用的一种实验动物，探讨昆明白小鼠胚胎干细胞建系方法更具应用广泛性。本实验研究了内细胞团(IcM)获取方法，培养系统，传代方法等胚胎干细胞建系过程中必不可少的技术环节，探索了大鼠心肌细胞条件培养基培养胚胎干细胞效果；对比了不同饲养层对胚胎干细胞集落形成的影响及维持能力，结果表明：自制的兔抗小鼠多克隆抗体能有效去除小鼠囊胚的滋养层；将获得

2、的ICM在小鼠胚胎成纤维细胞(PMEF)饲养层且添加白血病抑制因子(LIF)条件下培养，胚胎干细胞传代效果最佳，体外培养已传至第8代；所培养的ES细胞具有巢状集落形态，和周围饲养层细胞存在明显界线，集落内部细胞间连接紧密；ES集落经碱性磷酸酶染色呈强阳性；体外分化检测发现培养的胚胎干细胞仍具有较强的多能性：对其进行冷冻及复苏实验，解冻后ES细胞可以存活并生长增殖。此外，本论文还就干细胞研究的发展过程、技术进步、存在的问题以及研究趋势等方面作了概括性的综述。关键词：昆明白小鼠，胚胎干细胞，内细胞团，、碱性磷酸酶染色THEESCELLLINEESTABLISⅢNGANDCHAR

3、ACTERISTICRESEARCHONKI玲心ⅡNGBAI／STRAINMOUSEEmbryonicstemcellshavethetotipoteneyofdifferentiation．InvestigateandUSCtheEScellsisoneofthehotspotofbiologyengineering．MostoftheEScelllines辩developedfroml29，C57BL／6J,BALA／Cstrain．ResearchesofestablishingtheEScelllineofKunmingBai／stralnmousewererare

4、．Asawidelyusedlaboratoryanimal，investigatethemethodsofbuildingitsEScelllinehasextensiveapplication．ThisstudymainlyinvestigatedthemethodofICMisolation,thecelllinepassagetothenextgeneration,and也ecultureeffectofEScellclonesintheRH-CM．Differentfeederkinds’impactonESclonesWerealsocompared．There

5、sultsshowedthatthemulti-elonalantibodyofrabbit-anti-mOuseCalleffectivelydestroythetrophoblastcellsofmouseblastocysts．Thepas鼢geofinnercellmassesisolatedbyimmuno-surgerywasbestwhenculturedontoPMEFfeeder&LIFsystem．TheESclonehavepassedtothe8thpassa萨sinvitro．TheEScellhastheabilitytoformnest-lik

6、eclone，theboundariesofESclonesareclear,theESceilsclonesareverycompact．TheyWereAKPpositiveincolottrofdcepbrown，andstillhavepluripotencytOdifferentiateintomanycelltypes．Afterrefrigerationanddepositatliquidnitrogen,theEScellsWerethawedandsurvivedinvitro．Thisstudyalsogivesasummaryincludethepro

7、cessofEScellsdevelopment，progressonESceilstechnology,existingproblemandtheprospectofitsfuture．KEYWORDS：酬ingBai／stralnMouse，EScell，ICM，AKPstainKeyLaboratoryofMammalReproductiveBiologyandBiotechnology,MinistryofEducation，InnerMongoliaUniversity,Huhhot,China,0100