β+arestins转基因小鼠制备、建系与功能的研究初探

《β+arestins转基因小鼠制备、建系与功能的研究初探》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、内蒙古大掌硕士掌位论文Barrestins转基因小鼠制备、建系及功能研究初探摘要在G蛋白偶联受体(GPCRs，7TMRs)信号转导中，经典的理论认为p—arrestins使激活的受体与G蛋白解偶联(脱敏)，阻断了受体信号转导，进而导致受体内吞。近来的研究发现[3--arrestins不仅终止GPCRs的信号，还可以介导GPCRs的内吞和运输，引发GPCRs的新信号，以及介导GPCRs和其它信号通路间的交流。为了更进一步研究B．arrestins在活体水平上的功能定位，我们运用转基因技术，通过体外构建目的基因载体，原核期胚胎的显微注射，再进行PCR干ISouthernBlot鉴定，最终制备了hu

2、manl3arrestinIoverexpressionmice，human13arrestinIIoverexpressionmice，mouse0arrestinIRNAimice和mouseBarrestinIIRNAimice四种转基因鼠。经过实时荧光定量PCR鉴定纯合小鼠。自此，系统便初步建立起来。然后，我们进行RT-PCR和免疫组化试验，进行蛋白表达鉴定。阿片受体属于GPCRs超家族。因此体内过量表达B--arrestins有可能引起阿片成瘾的变化。于是我们采用甩尾法研究转基因小鼠对吗啡耐受的变化。由于海马区外源基因的表达，我们运用开场行为和Morris水迷宫实验证明其对空间记忆的

3、影响。关键词：G蛋白偶联受体，D—arrestins，转基因小鼠，吗啡耐受，空间记忆，开场行为，Morris水迷宫舞蓉甓r大掌磺墩掌位论文T珏EPRE姒RATl0NANDES鞑BLISHMENToFBETAARRESTINSTRANSGENlCMICEANDTHEPRELIMINARYRESEARC娃oFTHElR阳NCTlONSABST＆警CTInthefieldofsignal赶ansduct主onmediatedbyGprotein—coupledreceptors(GPCRs，7TMRs)，theclassicaltheoryisthat13--arrestinsuncouplethe

4、activatedreceptorsfromGproteins(desensitization)，preventfurthersignalingandstimulatetheendocytosisofreceptors．Ithasbeenwellestablishedthat爵一arrestinsnotonlyterminatetheGPCRssignals，butalsomediateendocytosisandtransportationofGPCRs。Theyalsoinitiateanddirectnewsignals，mediatethecrosstalkbetweenGPCRsan

5、dothersignalpassways。tnordertodiscoverthenewfimctionsof13--arresfinsinvivo，weapplythetransgenetecbmologyintomyfield，First，vectorswheretherearetransgenesareconstructedinvitro．Then，theyaremicroinjectedimopronucleusembryos．Afterthat，theoffspringsalescreenedbyPCRandSouthernBlot．Finally,wesetupfourkindso

6、ftransgenicmice，thosearehuman13arrestinIoverexpressionmice，human§arrestinIIoverexpressionmice，mouse§arrestinIRNAimiceandmouse0arrestinIIRNAimice．AndthehomozygousmicearescreenedbyrealtimePCR．Sothetransgenicmicesystemisestablishedelementarily．ThenthetransgeneexpressionischeckedbyRT-PCRandimmunohistoch

7、emicaltechnique．Opioidreceptorsbelongtothelargesuperfamily内蒙古大掌司【士掌位论文ofGPCRs．Sooverexpressionof--arrestinsinvivoprobablyinfluencesthedrugaddiction．Westudythemorphinetoleranceinthetransgenicmicebytail