小鼠es细胞的定向诱导分化和建系实验的研究

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1、浙江入学坝l‘论_jc=略语AgarAKPBRLeellBSACLSMDMEMDMSOEBsEC细胞EDTAEGFES细胞FCSFGFFITCGABAGelatinGFPGluHCGICMsMAP．2MEFmLIFNBSNestin略语表中文全称软琼脂碱性磷酸酶Buffalo大鼠肝脏细胞牛血清蛋白激光共聚焦显微镜Dulbecco改良培养基二甲亚砜胚体胚胎癌细胞乙二胺四乙酸表皮生长因子胚胎干细胞胎牛血清成纤维细胞生长因子异硫氰酸荧光素Y一氨基丁酸明胶绿色荧光蛋白谷氨酸人绒毛膜促性腺激素内细胞团微管相关蛋白一2小鼠成纤维细胞小鼠白血病抑制因子新生牛血清巢蛋白．4．英文全称alkalinephos

2、phataseBuffaloratliveeellbovineserulnalbuminconfocallaserscanningmicroscopyDulbecco’SmodifiedeaglemediumdimethylsulphoxideembryonicbodiesembryoniccarcinomacellsethylenedisminetetraaceticacidepidermalgrowthfactorembryonicstemcellfetalcalfserumfibroblastgrowthfactorfluoresceinisothiocynateY—aminobuty

3、ricacidgreenfluorescentproteinglumaticacidhumanchorionicgonadotropininnereellmassesmicrotubule·associatedprotein2mouseembryofibroblastmouseleukemiainhibitoryfactornewbovineserum浙江人学顾I：论文NF．MNGFNMDAPEPOCsPI-ISCPMSGRASCFSSEA．1TOF．BlTrypsinTSC神经丝．M神经生长因子N．甲基．D一门冬氨酸藻红蛋白原始生殖细胞多能造血干细胞孕马血清促性腺激素维甲酸(视黄酸／维生素

4、A酸)干细胞因子时期专一性胚胎抗原一l转化生长因子B一胰蛋白酶畸胎瘤干细胞neurofilament-MneuralgrowthfactorN·methyl—D·aspartatephycoerthrinprimordialgermcellspluripotentialhematopoieticstemcellpregnantmare’sselRlmgonadotropinretinoicacidstemeellfactorstage-specificembryonicantigen·1transforminggrowthfactor13teratocarcinomastemcells浙江人

5、学倾卜论史摘要近年来，胚胎干细胞(EScells)以其具有全能性、可操作性和可塑性等诸多优点，已经成为医学和生命科学领域研究的热点之一。研究者们试图用Es细胞建立糖尿病、老年型痴呆、帕金森氏症等遗传疾病转基因动物模型。在这些研究中，最关键的是ES细胞的来源和定向诱导分化问题。进行一系列研究必须要有足够的ES细胞，特别是建立转基因动物模型，需要lO代以内的ES细胞；而用作细胞治疗研究也必须解决其他分化细胞的影响问题。在我们的实验中，以小鼠Es—D3细胞系为对象，通过细胞培养大量增殖未分化细胞，再用两种方法进行ES细胞向神经细胞的诱导分化实验。首先从胚体(EBs)本身探讨ES细胞内部调控诱导分化

6、的机制，用悬浮培养、悬滴培养、悬浮转悬滴培养的方法培养出不同时间的EBs，再加以RA处理，观察比较EBs对ES细胞神经分化的影响；在此基础上．用不同浓度的RA处理EBs，分析诱导荆RA对Es细胞神经分化的影响。结果表明，用10-6M的RA处理悬滴培养3d转悬浮培养1d的EBs4d，能得到较高的神经分化比例。同时，为以后开展转基因动物模型的研究，我们还进行了小鼠ES细胞建系的部分工作。以ICR小鼠和昆明小鼠为实验对象，采用超数排卵的方法获得小鼠胚胎，培养在用丝裂霉素C处理过的ICR小鼠和昆明小鼠MEF细胞饲养层上，选取适当时I'HJ离散增贿的ICM和类Es细胞集落，分析了在小鼠ES细胞建系过程

7、中，饲养层细胞、消化液及不同品系来源的胚胎的影响。从实验结果来看，ICR小鼠和昆明小鼠两种来源的饲养层细胞对胚胎贴壁、ICM增殖无影响，消化液作用影响明显，以0．125％trypsin+0．02％EDTA消化10--15min为宜。以上结果表明：1CR小鼠比昆明小鼠更易进行ES细胞的建系工作。关键词：胚胎干细胞(ES细胞)神经细胞胚体(EBs)维甲酸(RA)内细胞团(ICM)类ES细胞集落浙江人学硼I‘论文A