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《人参皂苷ro碱水解动力学探究和水解产物结构解析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、人参皂昔Ro碱水解动力学探究和水解产物结构解析[摘要]研究人参皂昔Ro在碱性条件下的稳定性,考察了不同温度不同pH下人参皂昔Ro的水解情况,结果发现水解符合一级动力学反应。水解速率与水解温度和水解体系的pH相关,相同的水解温度,pH越高,水解越快;相同的pH,温度越高水解越迅速。对水解产物进行分离,通过质谱、核磁等手段鉴定水解产物为姜状三七皂昔R1(zingibroside-Rl)o该研究为评价人参皂昔Ro环境特性提供一定依据,也为姜状三七皂昔R1的制备提供一种方法。[关键词]人参皂昔Ro;水解动力学;结构解析;姜状三七皂
2、昔R1[收稿日期]2013-10-09[通信作者]*柳文媛,教授,博士生导师,E-mail:liuwenyuan8506@163.com;*叶正良,研究员,硕士生导师,E-mail:yezl@tasly.com[作者简介]朱琼,硕士研究生,E-mail:happyzhuqiong@126・com人参皂昔Ro(ginsenoside-Ro)为齐墩果烷型人参皂昔,又被称为竹叶参V,存在于人参[1]、牛膝、竹叶参中[2]。具有表面活性剂作用,对柴胡皂昔具有增溶的作用[3],能促进细胞增生,调节小鼠脾细胞Thl/Th2型细胞因子的
3、产生[4],能促进毛发生长[5-6],人参皂昔Ro还能抑制5a-还原酶和抗慢性心绞痛的作用[7]。人参皂昔Ro不稳定[8],在加热条件中酯昔键易破坏,这种报道大多集中在定性分解及通过结构物质推测其产物。人参皂昔Ro结构中含有酯昔键,在碱性条件中易发生水解,但目前尚无人参皂昔Ro在碱性条件下的水解动力学研究报道。本文主要为了研究人参皂昔Ro在碱性条件下的结构和含量变化规律,为含有人参皂昔Ro的中药制剂的生产过程控制提供参考,也为含有人参皂昔Ro的中药制剂稳定性评价提供依据。因此本文进行了人参皂昔Ro在碱性条件下的水解动力学研
4、究,并且对碱水解产物的结构进行了结构鉴定。1材料人参皂昔Ro对照品(天津马克生物科技有限公司,纯度为99%,批号20130912);氯仿为分析纯,甲醇、乙惰为色谱纯(德国Merck公司),磷酸为色谱纯(天津市光复精细化工研究所),超纯水为实验室自制;Waterse2695高效液相色谱仪‘Waters2489紫外检测器,岛津UFLC-IT-TOF,Bruker400M核磁共振仪,Milli-Q超纯水系统(美国Millipore公司),XS105梅特勒精密电子分析天平(上海梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。2方法与结果2.1人
5、参皂昔Ro水解产物测定2.1.1色谱检测条件WatersSymmetryC18柱(4.6mmX250mm,5Pm);流动相乙睛-0・05%磷酸;梯度洗脱,0〜20min,30%〜70%乙月青;流速1mL•min-1;检测波长203nm;柱温30°C;进样量10uLo人参皂昔Ro水解结果见图lo1.空白;2•对照品;3•水解样品;a.人参皂昔Ro;b.姜状三七皂昔R1。图1人参皂昔Ro水解HPLC图Fig.1HPLCchromatogramofthehydrolysiskineticsofginsenoside-Ro2.1.
6、2标准曲线的绘制取人参皂昔Ro对照品适量,配制成质量浓度为0.60g・L-1的储备液,分别稀释5,10,20,40,80,160倍,分别吸取上述不同质量浓度的人参皂昔Ro对照品10UL进样,测定其峰面积。以人参皂昔Ro的进样质量为横坐标(X),色谱峰的峰面积(Y)为纵坐标,进行线性回归,得标准曲线方程Y二3346554X+174456,(—0.9999,n二6),表明人参皂昔Ro在3.75X10-3〜0.12g•LT呈良好的线性关系。2.1.3检测限的测定取人参皂昔Ro适量,配制成合适浓度,进样检测,当信噪比为3时,检测浓
7、度为3.73ngo2.1.4定量限的测定取人参皂昔Ro适量,配制成合适浓度,进样检测,当信噪比为10时,该浓度为14.92ngo且将该浓度的人参皂昔Ro对照品连续进样6次,其RSD为0.7%,说明定量准确。2.1.5精密度试验吸取人参皂昔Ro对照品溶液10UL,连续进样6次,其RSD为0.4%,表明测定条件精密度良好。2.1.6稳定性试验将人参皂昔Ro对照品溶液放置0,2,4,8,12,24h后分别测定其峰面积,RSD为1.7%,表明溶液稳定性良好。2.2人参皂昔Ro碱水解动力学模型的建立2.2.1水解实验过程取人参皂昔R
8、o对照品适量,精密称定,置于25mL量瓶中,用甲醇溶解定容,摇匀,配制成质量浓度为1.08g・L-1的储备液。精密吸取该储备液1mL于25mL量瓶中,分别用pH为8.01,9.02,9.98,11.01,12.03,13.01的缓冲液稀释并定容,充分摇匀,分装于2mL的安甑瓶中,置于不同温度的水浴锅内,