人参皂苷水相助溶方法探究

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1、人参皂昔水相助溶方法探究(1.岳阳职业技术学院，湖南岳阳414000；2.湖南师范大学，湖南长沙410081)摘要：目的：寻找增加人参皂昔水相溶解度的方法。方法：在不同pH、温度、搅拌时间和使用潜溶剂的条件下，分别于水溶液中溶解人参茎叶皂昔和单体皂昔Rbl、Rgl.Re,分光光度法测定所试人参皂昔的溶解量。结果：在pH6.0〜&0范围内，人参茎叶总皂昔、Rbl、Rgl的溶解量随着pH的降低而增大；Re溶解量则在pH为7.0时最大。在5〜35£的范围内，人参皂昔溶解量均随着温度的增高而增加。搅拌时

2、间在一定范围内延长，可通过加速助溶作用而提高人参皂昔的溶解量。乙醇或丙二醇对人参皂昔均有助溶作用，乙醇+丙二醇的助溶效果更好。二甲基亚矶除了能使单体皂昔Re的溶解量稍有增高外，反而使人参茎叶皂昔、Rbl.Rgl的溶解量降低。结论：在适当pH值、温度和搅拌条件下，使用乙醇和丙二醇是人参皂昔水相溶解的有效助溶方法。关键词：人参皂昔；水溶液；助溶中图分类号：R286.1文献标识码：A文章编号：1673-7717(2007)05-0954-03人参皂昔(ginsenoside,GS)是人参的一类主要药效

3、成份。至今，从人参和同源植物中分离出的人参皂昔单体约有60多种，已鉴定分子结构的绝大多数人参皂昔都属于笛体皂昔家族。不同人参皂昔单体的水相溶解度不一，有些单体很难溶于水。近年来已使用多种生物学技术深入研究人参皂昔的药理作用，细胞培养是其中的一种重要方法。人参皂昔在细胞培养体系中的溶解量无疑会影响其作用效果，但目前尚未见到如何使人参皂昔在水相中如何充分溶解的研究报道。本工作主要以几种水相溶解度不同的人参皂昔为代表被试物，寻找一定pH、温度、搅拌时间的条件下促进人参皂昔溶于细胞培养体系的适宜潜溶剂及

4、其用量。1主要试剂及仪器紫外分光光度计（756MC型，上海分析仪器总厂），电热恒温水浴锅（501型，上海医疗器械五厂），快速混匀器（XK96—A型，江苏新康仪器厂）。人参皂昔Rbl、RgkRe（G—Rbl、—Rgl、-Re,纯度398%）和人参茎叶皂菅（gin-senosideofstemandleaf,GSL,纯度285%）标准品和样品：吉林大学基础医学部天然药物化学研究室提供；香草醛为天津化学试剂厂产品；冰醋酸和高氯酸为上海化学试剂一厂产品；无水乙醇（比重0.789-0.791）为湖南师范大

5、学化学试剂厂产品；1,2—丙二醇（比重1.036〜1.039）为天津B0DI公司产品；二甲基亚矶（dimethylsulfoxide,DMS0,比重L095〜1.102）为天津科密欧产品。以上化学试剂均为分析纯。2方法1.1标准溶液的制备精密称取G—Rbl、G-Rgl、G-Re和GSL各10mg,分别置10mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，制成lmg/mL标准溶液。2.2标准曲线制定和回归方程计算①精密吸取上述标准溶液各20、40、60、80、100uL,分别置lOmL具塞试管中，蒸干；用

6、无水乙醇设空白对照组。②取5%香草醛一冰醋酸溶液0・2iiiL,高氯酸0・8mL,混合加入各试管。3601水浴15min,取出后于冰水中迅速冷却15min,加入冰醋酸5.OmL,混匀；④用756MC型分光光度计在波长550nm处测定吸光度。每一标准溶液重复性测定5次,计算均值,绘制标准曲线，并计算出回归方程。2.3样品水溶液制备和吸光度测定①不同pH、温度和搅拌时间条件下的样品溶液配制：按上述标准溶液的制备方法，配制G-Kbl.G-Rgl.G-Re和GSL溶液，但用PBS作溶剂,分别控制配制条件

7、,pH为6.0、6.5、7.0、7.5、8.0,温度为5、25、35°C,搅拌时间为0、10、20、30mino将以上各样品溶液转至离心管中，5000r/min离心lOmin,制取上清液。分别吸取各样品液的上清液100uL,置10mL具塞试管中，蒸干，同时设空白对照组；按“2.2”操作步骤②及其之后的方法操作，测定各上清液的吸光度。②加潜溶剂的样品溶液配制：称取G—Rbl、G-Rgl.G—Re和GSL各lOmg,置lOmL容量瓶中，分别加入无水乙醇0・2mL、1.2—丙二醇0・26mL、无水乙醇

8、:丙二醇(1:1.3)混合液0.23mL.DMSO0.25mL,溶解后用PBS稀释至刻度，控制温度=25°C,pH=7.0,搅拌时间=20min,配制成4种样品溶液，均含潜溶剂0.35mmol/Lo按以上所述方法，制取上清液并测定吸光度。2.4样品水相溶解量的计算将GS各样品水溶液上清的吸光值代入标准溶液回归公式，计算试样中的样品量，然后用下式计算出每100mL试液中的所测样品的溶解量(mg/100mL):c=(M/V0X100C：样品溶解量(mg/00mL),M：样品量(ug),V：上清取样体