白头翁总皂苷碱水解产物的抗肿瘤作用及机制研究

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1、硕士学位论文论文题目白头翁总皂苷碱水解产物的抗肿瘤作用及机制研究研究生姓名季秀美指导教师姓名杨世林刘艳丽专业名称药物化学研究方向天然药物化学论文提交日期2013年5月白头翁总皂苷碱水解产物的抗肿瘤作用及机制研究中文摘要白头翁总皂苷碱水解产物的抗肿瘤作用及机制研究中文摘要目的：前期工作提示白头翁总皂苷具有明显的体内外抗肿瘤作用，其碱水解产物体外抗肿瘤作用优于白头翁总皂苷。本论文将系统探讨白头翁总皂苷碱水解产物（PAHS）的抗肿瘤作用及其可能的机制。方法：采用HPLC-ELSD法对PAHS中8种含量较高的皂苷进行测定；采用MTT及集落形成实验检测白头翁总皂苷碱水解产

2、物对人肝癌SMMC-7721以及人肺癌A549的增殖抑制作用，同时采用Giemsa染色观察PAHS对肿瘤细胞形态的改变；在体内，建立小鼠肉瘤S180、小鼠肝癌H22、C57小鼠Lewis肺癌模型，取荷瘤小鼠血液进行血液检查并对小鼠肿瘤组织进行病理检查；在机制方面，采用hoechest33342染色观察SMMC-7721凋亡细胞形态变化；通过流式细胞仪检测PAHS对7721及A549细胞凋亡及周期的影响；采用westernblot法检测线粒体通路和PI3K通路内重要信号分子的表达。结果：HPLC结果表明，白头翁总皂苷碱水解产物中8种皂苷单体（白头翁皂苷D、常春藤皂

3、苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、白头翁皂苷、hederacolchisideA1、白头翁皂苷F、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉）含量的总和超过85%；MTT及集落形成实验表明PAHS(0.80-25.00μg/ml)可以时间和剂量依赖性的抑制SMMC-7721及A549细胞的增殖，抑制7721细胞集落的形成；体内试验

4、表明白头翁总皂苷碱水解产物(50，100，200mg/kg)可以抑制小鼠肉瘤，小鼠肝癌及肺癌的生长且具有剂量依赖性，在给药剂量200mg/kg时三种模型的抑制率分别达到49.8%、43.7%、70.6%，HE染色表明PAHS组(50，100，200mg/kg)小鼠肿瘤组织均有大面积坏死及凋亡细胞的出现。电镜切片检查发现，荷肝癌小鼠及荷Lewis肺癌小鼠肿瘤组织均出现染色质集聚成团、边集等明显细胞凋亡特征;与CTX组相比，PAHS处理组小鼠的脾系数、胸腺系数均有提高，提示PAHS的免疫抑制作用较小。机制研I中文摘要白头翁总皂苷碱水解产物的抗肿瘤作用及机制研究究表明

5、，PAHS(6.25，12.50，25.00μg/ml)可以诱导SMMC-7721及A549细胞凋亡，同时可以将SMMC-7721细胞周期阻滞在S期，将A549细胞生长阻滞在G0/G1期。westernblot实验结果表明白头翁总皂苷碱水解产物可以上调Cyt-C，CleavedCaspase-3，Bax等蛋白的表达，同时下调PI3Kp85、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K等相关蛋白的表达。结论：白头翁总皂苷碱水解产物具有抗肺癌和肝癌的作用，其机制可能与调节PI3K/AKT/mTOR信号通路引起的细胞凋亡有关。关键词：白头翁总皂苷碱水解产物；抗肿瘤；细胞

6、凋亡；PI3K/AKT/mTOR信号通路作者：季秀美指导老师：杨世林教授指导老师：刘艳丽副教授IIAntitumoreffectandmechanismsofalkalihydrolysateoftotalsaponinsfromPulsatillachinensisAbstractAntitumoreffectandmechanismsofalkalihydrolysateoftotalsaponinsfromPulsatillachinensisAbstractAim:Inourpreviousstudy,wefoundthattotalsaponinsfr

7、omPulsatillachinensisinhibitedthegrowthoftumorsinvivoandinvirtro.Comparedwithtotalsaponins,Alkalihydrolysateoftotalsaponinshadbetterantitumoreffect.Inthisstudy,wewillinvestigateantitumoreffectandmechanismsofalkalihydrolysateoftotalsaponinsfromPulsatillachinensis.Methods:TheHPLCmethod

8、wasusedtodet