茅莓总皂苷体外抗肿瘤作用研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果茅莓总皂苷体外抗肿瘤作用研究作者：郑振张玲菊黄常新黄巧玲尉晓冬叶建根茅莓，别名天青地白草、红梅消、三月泡，为蔷薇科悬钩子植物，具有活血化瘀，清热解毒等作用。本研究选择了HR8348直肠腺癌细胞、A375黑色素瘤细胞、Hut-78人皮肤T细胞淋巴瘤细胞和A431人表皮癌细胞为癌细胞株，用茅莓总皂苷对它们进行体外抗肿瘤试验,同时检测了茅莓总皂苷对HR8348直肠腺癌周期的影响，结果显示对前三种肿瘤有良好的抗肿瘤活性，通过将细胞周期阻滞在S期在而发挥抗肿瘤作用。　　

2、1材料与方法茅莓总皂苷茅莓总皂苷由浙江省中医药研究院提取。实验所用高中低三种浓度分别为1mg%、%和%。细胞株HR8348直肠腺癌细胞、A375黑色素细胞瘤细胞、Hut-78人皮肤T细胞淋巴瘤细胞和A431人表皮癌细胞。主要药品与试剂茅莓总皂苷，环磷酰胺；多聚甲醛AR；RPMI课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果1640粉末，使用时按要求配制成培养液，并加入10％灭活小牛血清和100μ

3、g链霉素；胰蛋白酶，使用时用磷酸盐缓冲液(PBS)配制成％的溶液；MTT(噻唑兰)，DMSO(二甲基亚砜)；胎牛血清；PBS将A375人恶性黑色素瘤细胞、HR8348结肠癌细胞、A431表皮癌细胞和Hut-78人皮肤T细胞淋巴瘤细胞分别与%胰酶、%EDTA混合消化后计数调节细胞为1×105/ml，于96孔板加入18μl，并同时加入不同浓度的药液20μl/孔。以加入环磷酰胺及不加药作对照。CO2培养箱培养48h后，加入噻唑兰PBS溶液5mg/ml，再培养4h,直接加入二甲基亚砜振荡10min，于酶标仪570nm测A值。茅莓总皂苷对HR8348直肠腺癌细胞细胞周期的影响HR8348直肠腺癌细胞经

4、茅莓总皂苷处理后用胰酶消化，PBS洗涤，7０％乙醇固定，置于4℃冰箱内过夜。次日用PBS洗2次，调整细胞浓度至1×106／ml，用PI染液避光染色30min，流式细胞仪FACSCalibur检测。每样本检测10000个细胞，按FACSORT软件进行曲线拟合分析，计算DNA含量，得出细胞周期(G1、S、G2+M)的百分比。统计学分析各实验结果表示为(x±s),数据间差异性统计选用双侧t检验。　　2结果.1MTT比色法测定茅莓总皂苷对HR8348结肠癌细胞增殖的影响课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重

5、选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果结果表明，高、中浓度茅莓总皂苷药对结肠癌细胞HR8348增殖有明显的抑制作用。见表1。表1茅莓总皂苷对HR8348结肠癌细胞增殖的影响注:与对照组5比较P.2MTT比色法测定茅莓总皂苷对皮肤T细胞淋巴瘤细胞增殖的影响结果表明，高、中浓度茅莓总皂苷药对皮肤T细胞淋巴瘤细胞Hut-78增殖有明显的抑制作用。见表2。表2茅莓总皂苷对皮肤T细胞淋巴瘤细胞增殖的影响注:与对照组5比较P.3MTT比色法测定茅莓总皂苷对A375人恶性黑色素瘤细胞增殖的影响结果表明，高、中浓度茅莓总皂苷对A

6、375人恶性黑色素瘤细胞增殖有明显的抑制作用。见表3。表3茅莓总皂苷对黑色素细胞瘤A375细胞增殖的影响注:与对照组5比较P.4MTT比色法测定茅莓总皂苷对人表皮癌A431细胞增殖的影响结果表明，高、中浓度茅莓总皂苷药对人表皮癌A431细胞增殖无明显的抑制作用。见表4。表4茅莓总皂苷对人表皮癌A431细胞增殖的影响注：与对照组5比较P.5茅莓总皂苷对HR8348直肠腺癌细胞周期的影响如表5所示：茅莓总皂苷高、中浓度(1mg%、%)作用于HR8348直肠腺癌细胞72h后，S期细胞分别占和与对照组比较有显著性差异(P　　3讨论近年来的研究课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕

7、士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果表明植物中的三萜皂苷具有较强的抗肿瘤作用［１～３］，多数已作为抗癌中药试用于临床［４］。茅莓作为悬钩子属植物仅在民间作为抗肿瘤中草药应用，尤其是消化道肿瘤。近几年的研究发现茅莓提取物中含有多种三萜类化合物［５，６］，而国