紫花茄皂苷的体外抗肿瘤及溶血性实验研究论文

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1、紫花茄皂苷的体外抗肿瘤及溶血性实验研究论文【摘要】目的探讨紫花茄皂苷I1对人肝癌BEL7402细胞的抗肿瘤作用并对其进行溶血性检查。方法用酸性磷酸酶（APA）法测定不同浓度紫花茄皂苷处理人肝癌BEL7402细胞后的OD405值。体外溶血性实验检测皂苷安全性。结果紫花茄皂苷对BEL7402细胞有明显的抗肿瘤作用，在皂苷作用72h后，实验组与对照组的OD405值比较差异有显著性（P＜0.05）。体外溶血实验，100μg·ml-1的皂苷Ⅰ1不引起兔红细胞的溶血和凝集。结论紫花茄皂苷I1对人肝癌细胞的抗肿瘤

2、作用呈明显的浓度依赖性,在体外安全性较好。【关键词】皂苷抗肿瘤溶血【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheantineoplasticactivityandbloodcellhaemolysistestonsaponin.MethodsTheOD405valueofcellentbytheacidphosphataseassay(APA).Thesafetyofsaponininedbyhaemolysisandbloodcellagglutinationtests.Results

3、ThesaponinsignificantlyinhibitedproliferationofBEL7402cells.ApparentdifferenceinOD405valuel-1saponincausednohaemolysisandbloodcellagglutinationinvitro.ConclusionThesaponinI1hasconcentrationdependentantineoplasticactivityonhumanhepatocarcinomacells.Thesafe

4、tyofsaponinolysis皂苷是广泛存在于高等植物和某些低等动物中的一类具有广泛药理活性的三萜及甾体的糖缀合物，很多中草药的主要活性成分都是皂苷类化合物。近年来随着分离提取技术的不断发展，多种薯蓣皂苷被分离出来，并不断发现其新的生物活性，特别是在抗肿瘤、免疫调节、干预细胞信号转导、抗炎、降血脂、抗艾滋病等方面的作用引起了人们的重视［１.freelpus）。1.2实验动物新西兰大白兔，雄性，体重2.5kg，由滨州医学院实验动物中心提供。1.3药物及配制紫花茄皂苷I1由中国科学院生态研究环境中心生物技术室

5、提供。以二甲基亚砜（DMSO）溶解后用生理盐水稀释至100μg/ml，其中DMSO浓度为0.1％。1.42%红细胞悬液的制备取10ml新鲜新西兰兔血，滴入含2500IU肝素钠的离心管中，加入10ml生理盐水，摇匀后2500r/min离心5min，倾去上清液，再加生理盐水混合离心，反复洗4次，最后一遍用巴比妥钠缓冲液洗至上清液呈无色透明，然后将所得红细胞用巴比妥钠缓冲液稀释成红细胞压积百分比为2%的红血细胞混悬液。1.5酸性磷酸酶法（acidphosphataseassay,APA）［7］检测细胞存活率取对数生长

6、期细胞，消化后制成细胞悬液，按1×103/孔的密度接种于96孔板。培养24h后，实验组加入先用二甲基亚砜（DMSO）溶解、再经RPMI1640培养液稀释至终浓度为1～10μg·ml-1的皂苷；空白对照组加入RPMI1640培养液；溶剂对照组加入经同样稀释的溶剂，含0.01%～0.1%DMSO。实验中每个浓度设8个平行孔，作用72h后用APA法经EL311酶联免疫检测仪在405nm波长处测定吸光度OD值，空白孔调零，实验重复三次，取平均值。1.6溶血性实验［8，9］在2%的兔红血细胞混悬液中，分别加入不同体积

7、的100μg·ml-1的皂苷Ⅰ1，轻轻摇匀置37℃水浴中保温1h后，2000r/min离心5min，每管取上清100μl，经EL311酶联免疫检测仪于波长405nm测量吸光度。第6组不加皂苷,作为空白阴性对照；第7组不加皂苷并用蒸馏水代替巴比妥钠缓冲液，作为充分溶血阳性对照（表1）。空白组调零，每组设3个平行孔，计算吸光度平均值。实验重复三次，取平均值。根据吸光度平均值按下式计算相对溶血率：相对溶血率＝OD实验组/OD阳性对照×100％。表1各实验组配比量表1.7统计学方法所得数据以均数±标准差表示，采用SP

8、SS10.0统计分析软件包分析统计学差异。2结果2.1紫花茄皂苷的体外抗肿瘤作用不同浓度的紫花茄皂苷I1作用于BEL7402细胞72h后,APA法测定结果如表2,实验表明，加药组从2.0μg·ml-1起，与对照组的OD405比较，即有显著性差异(P＜0.05),而且随着皂苷浓度的增加抗肿瘤作用也增加,呈剂量依赖性。表2紫花茄皂苷I1对BEL7402细胞抗肿瘤作用注：与空白对照比