紫花茄皂苷的体外抗肿瘤及溶血性实验研究的论文

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1、紫花茄皂苷的体外抗肿瘤及溶血性实验研究的论文【摘要】目的探讨紫花茄皂苷i1对人肝癌bel7402细胞的抗肿瘤作用并对其进行溶血性检查。方法用酸性磷酸酶（apa）法测定不同浓度紫花茄皂苷处理人肝癌bel7402细胞后的od405值。体外溶血性实验检测皂苷安全性。结果紫花茄皂苷对bel7402细胞有明显的抗肿瘤作用，在皂苷作用72h后，实验组与对照组的od405值比较差异有显著性（p＜0.05）。体外溶血实验，100μg·ml-1的皂苷ⅰ1不引起兔红细胞的溶血和凝集。结论紫花茄皂苷i1对人肝癌细胞的抗

2、肿瘤作用呈明显的浓度依赖性,在体外安全性较好。【关键词】皂苷抗肿瘤溶血【abstract】objectivetoinvestigatetheantineoplasticactivityandbloodcellhaemolysistestonsaponin.methodstheod405valueofcellentbytheacidphosphataseassay(apa).thesafetyofsaponininedbyhaemolysisandbloodcellagglutinationtests.resu

3、ltsthesaponinsignificantlyinhibitedproliferationofbel7402cells.apparentdifferenceinod405valuel-1saponincausednohaemolysisandbloodcellagglutinationinvitro.conclusionthesaponini1hasconcentrationdependentantineoplasticactivityonhumanhepatocarcinomacells.the

4、safetyofsaponinolysis皂苷是广泛存在于高等植物和某些低等动物中的一类具有广泛药理活性的三萜及甾体的糖缀合物，很多中草药的主要活性成分都是皂苷类化合物。.近年来随着分离提取技术的不断发展，多种薯蓣皂苷被分离出来，并不断发现其新的生物活性，特别是在抗肿瘤、免疫调节、干预细胞信号转导、抗炎、降血脂、抗艾滋病等方面的作用引起了人们的重视［１，２］。紫花茄皂苷是根据从紫花茄中分离出的甾体皂苷化学合成的薯蓣皂苷［３］，具有较强的抗肿瘤活性。我们的研究表明紫花茄皂苷可以诱导肝癌细胞凋亡［4］，在肝病用药

5、中很有前途。本研究对紫花茄皂苷进行体外抗肿瘤及溶血性实验，结果报道如下。1材料与方法1.1主要试剂及仪器rpmi1640培养基购自gibcobrl公司。dhanks液，pbs缓冲液，0.1%edta溶液等均按常规配制［5，6］，新生牛血清（黑龙江省同江市江海生物公司），二氧化碳培养箱（hereus公司)，96孔细胞培养板（nunc公司），el311酶标免疫检测仪（biotek公司），相差倒置显微镜（olympus）。1.2实验动物新西兰大白兔，雄性，体重2.5kg，由滨州医学院实验动物中心提供。1.3药

6、物及配制紫花茄皂苷i1由中国科学院生态研究环境中心生物技术室提供。以二甲基亚砜（dmso）溶解后用生理盐水稀释至100μg/ml，其中dmso浓度为0.1％。　1.42%红细胞悬液的制备取10ml新鲜新西兰兔血，滴入含2500iu肝素钠的离心管中，加入10ml生理盐水，摇匀后2500r/min离心5min，倾去上清液，再加生理盐水混合离心，反复洗4次，最后一遍用巴比妥钠缓冲液洗至上清液呈无色透明，然后将所得红细胞用巴比妥钠缓冲液稀释成红细胞压积百分比为2%的红血细胞混悬液。1.5酸性磷酸酶法（acidpho

7、sphataseassay,apa）［7］检测细胞存活率取对数生长期细胞，消化后制成细胞悬液，按1×103/孔的密度接种于96孔板。培养24h后，实验组加入先用二甲基亚砜（dmso）溶解、再经rpmi1640培养液稀释至终浓度为1～10μg·ml-1的皂苷；空白对照组加入rpmi1640培养液；溶剂对照组加入经同样稀释的溶剂，含0.01%～0.1%dmso。实验中每个浓度设8个平行孔，作用72h后用apa法经el311酶联免疫检测仪在405nm波长处测定吸光度od值，空白孔调零，实验重复三次，取平均值。1

8、.6溶血性实验［8，9］在2%的兔红血细胞混悬液中，分别加入不同体积的100μg·ml-1的皂苷ⅰ1，轻轻摇匀置37℃水浴中保温1h后，2000r/min离心5min，每管取上清100μl，经el311酶联免疫检测仪于波长405nm测量吸光度。第6组不加皂苷,作为空白阴性对照；第7组不加皂苷并用蒸馏水代替巴比妥钠缓冲液，作为充分溶血阳性对照（表1）。空白组调零，每组设3个平行孔，计算吸光度平均值。