三七不同部位总皂苷溶血性及体外免疫活性研究.doc

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1、三七不同部位总皂苷溶血性及体外免疫活性研究　　摘要：通过常规正丁醇法提取，大孔树脂层析分离纯化得三七总皂苷；通过溶血试验测定红细胞溶血率；脾淋巴细胞增殖试验测定三七不同部位总皂苷的生物免疫活性。结果表明，三七不同部位总皂苷溶血性较小，且均能显著促进ＣｏｎＡ和ＬＰＳ诱导小鼠淋巴细胞增殖反应，其免疫增强作用以三七主根总皂苷的效果较好。表明三七不同部位总皂苷安全性好，能促进细胞免疫和体液免疫。　　关键词：三七总皂苷；生物免疫活性；溶血性；脾淋巴细胞增殖反应　　中图分类号：Ｒ３９２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11423－4905-03　　　

2、　ＳｔｕｄｙｏｎＨｅｍｏｌｙｔｉｃＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄＩｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＰａｒｔｓｏｆ　　Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ　　　　LIANGYong，QINFeng，TANGXiao-lei　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇｓａｐｏｎｉｏｎｓwaspurifiedbycｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｂｕｔａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎandｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Eｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｈｅｍｏｌｙｓｉｓratewasdetermine

3、dbyhemdytictest，ＰＮＳｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｉｍｍｕｎｅａｃｔｉｖｉｔｙfromdifferentpartsofP.notoginsengwasmeasuredbyspleenlymphocyteproliferationtest．ＲｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｈｅｍｏｌｙｔｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆＰ.ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇwereｓｍａｌｌｅｒ，ａｎｄｃouldｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｒｏｍｏｔｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄbyConAan

4、dLPS，andｉｍｍｕｎｅｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｔｏｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｏｆＰ.ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇｒｏｏｔwaｓｂｅｔｔｅｒ．ＴｈｅｓｔｕｄｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔthesecurityofPNSfromｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆＰａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇｗａｓｇｏｏｄ，ａｎｄｃｏｕｌｄｐｒｏｍｏｔｅｃｅｌｌｕｌａｒａｎｄｈｕｍｏｒａｌｉｍｍｕｎｉｔｙ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇｓａｐｏｎｉｏｎｓ；ｂｉｏｌｏｇｉｃｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅ；ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｃｈ

5、ａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ；ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　　中药三七来源于五加科植物三七Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ），主产于我国广西云安，为我国特产的传统珍贵中药材。三七主根习称“头子”，支根习称“筋条”。三七总皂苷是三七的主要生理活性成分，具有扩张血管、降低心肌耗氧量、延长凝血时间、调节免疫等药理作用。三七总皂苷在高等动物的消化道中不能被吸收，故口服无溶血毒性，但其注射剂应用于临床有很小的溶血性，故研究皂苷的溶血性对临床用药安全性评价有很大的作用。目前三七总皂苷在免疫领域的研究较少，三七不同部位总皂苷的免疫活性研究基本上还是空白［

6、1］。本试验通过探讨不同部位总皂苷的溶血性和体外免疫活性，为ＰＮＳ提取工艺的优化、分离纯化及临床合理用药等提供一定的参考。　　１材料与方法　　１．１材料与仪器　　三七药材、三七筋条药材，均购于泰州医药公司；ＴＵ－１８００紫外可见分光光度计；ＢＰ２１１Ｄ电子天平；ＲＥ－３０００旋转蒸发仪；ＳＨＺ－Ⅲ型循环水真空泵；ＴＧＬ－１６Ｇ型高速离心机；黄芪多糖：本实验室制备，含量大于６０％；Ｄ１０１大孔吸附树脂；ＲＰＭＩ１６４０细胞培养液；全自动酶标仪。其他试剂均为分析纯。普通级新西兰兔，１８～２２ｇ重的ＩＣＲ小鼠，均购自扬州大学畜牧医学院动物实验中心

7、。　　１．２方法　　１．２．１总皂苷的提取、分离［２］称取药材三七筋条粗粉，以体积分数７０％的乙醇回流提取３次，每次２ｈ，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浸膏加适量水混悬，用正丁醇萃取至正丁醇液近无色，合并萃取液，减压回收正丁醇，得粗制三七筋条总皂苷。粗制皂苷用蒸馏水溶解，经Ｄ１０１大孔吸附树脂柱色谱除去糖类水溶性杂质，然后以体积分数９５％的乙醇洗脱，合并洗脱液，减压回收乙醇，并浓缩至干，得精制三七筋条总皂苷。三七主根总皂苷的制备工艺同上。　　取上述２种皂苷适量，以生理盐水溶解制成质量浓度为４ｍｇ／ｍＬ的溶液，并以０．２２μｍ微孔滤膜滤过除菌

8、，备用。　　１．２．２红细胞悬浮液的制备［3］取新西兰兔１只，心脏取血１５ｍＬ，置于盛有玻璃珠的三角瓶中，轻轻振摇１５ｍｉｎ，去除纤维蛋白。将去纤维蛋白血加入１０倍量血球稀释液，