油茶皂苷b抗肿瘤作用及其机制研究

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1、ItMKSOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目油茶皂苷B抗肿瘤作用及其机制研兗研究生姓名杨萍指导教师姓名许琼明、刘艳丽、杨世林专业名称药物化学研究方向天然药物的活性研究论文提交日期2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人

2、承担本声明的法律责任。论文作者签名：曰期：H苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属

3、在_____年_月解密后适用本规定。非涉密论文H论文作者签名：和哼日期：Z油茶皂苷B抗肿瘤作用及其机制研究中文摘要油茶皂苷B抗肿瘤作用及其机制研究中文摘要目的：油茶皂苷B是从油茶根中提取、分离的三萜皂苷单体，前期研究发现有抗肿瘤作用，但其抗肿瘤作用机制还不清楚。因此，本研究采用体内外抗肿瘤实验方法来探讨油茶皂苷B的抗肿瘤作用和机制。方法：在体外，采用MTT法检测油茶皂苷B对肿瘤细胞增殖的影响；采用吉姆萨染色法观察细胞形态变化；Hoechst33342染色法观察细胞凋亡形态；AnnexinV-FITC/PI双染分析法检测肿

4、瘤细胞的凋亡率；采用细胞周期法检测油茶皂苷B对肿瘤细胞周期的影响；同时还采用了MDC染色、MDC荧光强度、透射电镜以及ROS活性氧测试等实验方法来探讨油茶皂苷B诱导肿瘤细胞自噬；用Westernblot方法分析油茶皂苷B对caspase3、Bcl-2、LC3、P53蛋白表达的影响；体内，采用小鼠H22实体瘤模型探讨油茶皂苷B在体内的抗肿瘤作用。结果：MTT法结果显示，油茶皂苷B可呈时间和剂量依赖关系抑制SMMC-7721人肝癌细胞和MCF-7人乳腺癌细胞的增殖；吉姆萨染色结果提示油茶皂苷B给药组细胞形态皱缩，变圆，染色加

5、深，细胞核浓缩；Hoechst33342染色观察到随着油茶皂苷B剂量的升高，细胞凋亡的数目变多；同时，AnnexinV-FITC/PI双染结果提示油茶皂苷B可诱导人肝癌细胞SMMC-7721和人乳腺癌细胞MCF-7发生凋亡，油茶皂苷B给药组诱导SMMC-7721和MCF-7细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加；通过对细胞周期的分析，油茶皂苷B诱导SMMC-7721细胞周期阻滞在G2/M期，呈剂量依赖性增加。MDC荧光染色和透射电镜结果分析可知，油茶皂苷B可诱导肿瘤细胞自噬，胞浆内自噬泡明显增加；ROS实验结果分析可知，油茶

6、皂苷B可诱导肿瘤细胞内ROS的释放；为了验证油茶皂苷B诱导的自噬与诱导的凋亡之间的关系，通过AnnexinV-FITC/PI分析结果可知，自噬抑制剂氯喹可抑制油茶皂苷B诱导的SMMC-7721和MCF-7肿瘤细胞凋亡，主要是影响早期凋亡的细胞数；Westernblotting结果表明，油茶皂苷B下调Bcl-2和上调Caspase3、p53与LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值，均I中文摘要油茶皂苷B抗肿瘤作用及其机制研究呈现出剂量依赖关系；油茶皂苷B能抑制或显著性抑制H22移植瘤生长(P<0.05)，且抑制率与剂量呈正相关，0.5

7、mg/kg抑制率为37.255%；1.0mg/kg抑制率为46.249%，但高剂量表现出一定的毒性。结论：油茶皂苷B可诱导SMMC-7721细胞和MCF-7细胞凋亡与自噬，其机制通过调节p53蛋白表达和活性氧的释放。关键词：油茶皂苷B；抗肿瘤；自噬；凋亡作者：杨萍指导老师：许琼明教授刘艳丽副教授IIThestudyonanti-tumoreffectsandmechamismsofsasanquasaponinBAbstractThestudyonanti-tumoreffectsandmechamismsofsasan

8、quasaponinBAbstractObject:SasanquasaponinBisatriterpenesapaoninsextractedfromtherootsofCamelliaoleiferaAbel.StudieshaveindicatedthatsasanquasaponinBhadtheanti-