高效液相色谱法测定天山花楸中的绿原酸含量论文

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1、高效液相色谱法测定天山花楸中的绿原酸含量论文.freelethodsＴｈｅＨＰＬＣｓｙｓｔｅｍｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆｔｈｅｃｏｌｕｍｎｏｆＯＤＳＺＯＲＢＡＳＯＤＳ（４．６ｍｍ×１５ｃｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎａｎｄＭｅＯＨ－０．０２％Ｈ３ＰＯ３ａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍｌ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉonｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ３２６ｎｍ．ResultsＴｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｌｉｎｅａｒｗｉｔｈｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ３．９５２～１９．７６μｇ／ｍｌ．ＣｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄｉｎｔｈｅｌｅａｆｏｆS．tianschanica

2、ｗａｓ１．９８２％（RSD％＝０．５８，n＝３）ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９９．４２％.ＣｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄｉｎｔｈｅｆｒｕｉｔｏｆS．tianschanicaｗａｓ２．２５９％（RSD％＝１．２，n＝３）ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９９．３２％．ConclusionＴｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｑｕｉｃｋａｎｄｈｉｇｈｌｙｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｉｔｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄｉｎＳ．ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ．Keywords：Sorbustian

3、chanica；Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄ；ＨＰＬＣ；Ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ蔷薇科Rosaceae花楸属植物天山花楸Sorbustianschanica，为维吾尔和哈萨克族民间常用药材。药理实验显示［１～３］，天山花楸枝叶兼有止咳、平喘、强心等多种药理功效，并且毒性很低。绿原酸是天山花楸中有效成分之一，广泛存在于自然界，属于咖啡酰奎尼酸衍生物，是植物体内有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物，为众多药材抗菌解毒、消炎利胆的主要有效成分。绿原酸除了抗氧化能力强外，还具有抗艾滋病毒、抗过敏、抗肿瘤等功能［４～７］。由于天山花楸中的绿原酸定量研究尚未见报道，为了

4、了解天山花楸中绿原酸的含量，更全面、综合地评价这一药用植物，更好地控制药材质量，开发传统中药材的潜力，我们建立了测定天山花楸叶与果中绿原酸的高效液相色谱方法［８，９］。1仪器与试药ＡｇｉｌｅｎｔＨＰ１１００型高效液相色谱系统，配有：四元泵，紫外检测器，ＨＰ１１００化学工作站；日本岛津ＵＶ２４０１（ＰＣ）紫外光谱仪；德国ＳａｒｔｏｒｉｕｓＢＰ２１１Ｄ十万分之一电子分析天平；索氏抽提装置；甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水，其他试剂均为分析纯；天山花楸供试品自制；绿原酸对照品由中国药品生物检定所提供。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为ＺＯＲＢＡＳＯＤＳＣ１８（４．６ｍｍ×１５ｃｍ，５μｍ）

5、色谱柱，检测波长为３２６ｎｍ；柱温３５℃；流速１．０ｍｌ·ｍｉｎ－１；进样量２０μｌ。流动相洗脱梯度见表１。表1流动相梯度洗脱（略）2.2对照品溶液和供试品溶液制备2.2.1绿原酸对照品溶液称取绿原酸对照品约２０ｍｇ，精密称定，置１００ｍｌ棕色容量瓶中，甲醇溶液稀释至刻度，作为贮备液。精密吸取贮备液５ｍｌ，置２５ｍｌ棕色容量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，即得对照品溶液。2.2.2天山花楸叶供试品取６０℃常压干燥至恒重天山花楸叶粉末约０．５ｇ，各３份，置索氏提取器中，加乙醚约８０ｍｌ，加热回流至无色，弃去乙醚，药渣挥干，再加甲醇８０ｍｌ，加热回流提取至无色，转移至１００ｍｌ容量瓶中

6、，甲醇定容，即得待测天山花楸叶供试品溶液。2.2.3天山花楸果供试品取３份６０℃常压干燥至恒重的天山花楸果实粉末约０．５ｇ，置索氏提取器中加甲醇８０ｍｌ，加热回流提取至无色，移至１００ｍｌ容量瓶中，甲醇定容，即得待测天山花楸果供试品溶液。2.3线性关系考察及稳定性实验精密移取１．０，２．０，３．０，４．０，５．０ｍｌ绿原酸对照品溶液，分别置１０ｍｌ棕色容量瓶中，用０．４５μｍ滤膜过滤，收集续滤液，进样量２０μｌ，按上述色谱条件测定。以峰面积Ａ对对照品浓度（μｇ／ｍｌ）进行线性回归，得标准曲线回归方程：A＝４６．１０７C－５９．５３２，r＝０．９９９６。绿原酸线性范围为３．９５２～

7、１９．７６μｇ／ｍｌ。取上述对照品溶液，每隔２ｈ按上述色谱条件测定峰面积，结果表明在１２ｈ内基本稳定（RSD＝２．８％）。2.4精密度实验精密移取对照品液２．０ｍｌ，置１０ｍｌ棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，照“２．３”项下进样，连续进样５次，绿原酸含量RSD＝２．７％。2.5重复性实验精密量取已知绿原酸含量的叶与果供试品溶液０．８ｍｌ，移至１０ｍｌ棕色容量瓶中，甲醇定容，照“２．３”项下进样，连续进样５次，叶的绿原酸含量RSD＝２．８％；果的绿原酸含量RSD＝０．７４％。2.