高效液相色谱法测定牛黄清胃丸中绿原酸的含量论文

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1、高效液相色谱法测定牛黄清胃丸中绿原酸的含量论文【摘要】目的：建立牛黄清胃丸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm,5μm，流动相：甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液（pH=2.7）（70：30，V/V），流速：1.0ml·min-1，检测波长：328nm，柱温：室温（22℃）。结果：绿原酸在0.01～0.25mg·ml-1范围内线性关系良好（r=0.9998）；平均加样回收率为98.3%，RSD=1.4%（n=6）。结论：该方法简便

2、易行，结果准确可靠.freelinationofChlorogenicAcidinNiuhuangqinethodforqualitycontrolofNiuhuangqingethodination.AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm,5μm).Themobilicphaseethanol-0.1molphosphoricNaH2PO4(70:30V/V).Thecolumntemperature,flol·min-1.RESULTSTheChlorogenicAcid;aver

3、ageofrecoveryrateethodissimple,accurateandsuitableforitsassaying.【Keyination牛黄清胃丸为《卫生部药品标准》第一册（中药成方制剂）收载的品种，由牛黄、菊花、黄芩、黄柏、桔梗、麦冬等17味中药组成，具有清胃泻火，润燥通便之功效。临床用于心胃火盛、头晕目眩、口舌生疮、牙龈肿痛、乳蛾咽痛、便秘尿赤1，疗效良好。处方中菊花为君药之一，绿原酸为其主要有效成分，原标准中只有显微鉴别。为了更好地控制制剂的内在质量，本文采用高效液相色谱法测定牛黄清胃丸中绿原酸的含量，以期为该制

4、剂的质量提供快速、准确的测定方法，现报告如下。1仪器与试药LC－2010A高效液相色谱仪，CLASS－VP色谱工作站；绿原酸对照品（批号：110753-200212），由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；牛黄清胃丸为市售样品（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，规格6g/丸，批号：7013189，6015504，7011172）。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm,5μm；流动相

5、：0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液取磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）15.6g，加水至1000ml，制成0.1mol/L的溶液，加入磷酸适量，使pH值为2.7-甲醇（70：30，V/V）；检测波长：328nm；流速：1.0ml.min-1；柱温：室温（22℃）。理论板数按绿原酸峰计应不低于2500。2.2溶液制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的绿原酸对照品适量置棕色量瓶中，加水制成0.1mg·ml-1的对照品溶液（10℃以下保存），即得。2.2.2供试品溶液的制备取重量差异项下的牛黄清胃丸，剪

6、碎，混匀，取约6g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，加热回流2小时，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加三氯甲烷5ml，浸渍3分钟，弃去三氯甲烷液，残渣挥去三氯甲烷，加水适量使溶解，并转移至2ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液2。2.2.3阴性对照溶液的制备取除菊花以外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成大蜜丸，再按供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。2.3专属性试验分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各

7、10μl注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（绿原酸9.707min）的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。2.4线性关系考察精密吸取绿原酸对照品贮备液（浓度：1.0mg·ml-1）各适量，分别置于10ml量瓶中，加水定容，配成浓度分别为0.01、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25mg·ml-1的溶液6份，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，得绿原酸的回归

8、方程为：A=2.19×10-2C＋1.82×10-2，r=0.9998（n=6）。结果表明，绿原酸在0.01～0.25mg·ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。2.5精密度和稳定性试验精密吸取绿原酸对照品溶液（0