高效液相色谱法分析测定半边旗中黄酮类化合物论文

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1、高效液相色谱法分析测定半边旗中黄酮类化合物论文龚先玲，陈志红，梁念慈【摘要】目的分析测定半边旗中木犀草素和芹菜素的含量。方法采用ODSC18分析柱（25mm×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇-0.4%的磷酸水溶液（1∶1）；检测波长345nm，流速1ml·min-1，柱温为25℃。结果木犀草素线性范围0.02～0.4μg，r=0.9999，平均回收率为96.39%(RSD=1.95%)；芹菜素线性范围0.02～0.4μg，r=0.9996.freelinationofFlavonoidsinPterissemipinnataL.by

2、HPLCAbstract：ObjectiveToanalyzeanddeterminethecontentofluteolinandapigenininPterissemipinnataL.byHPLC.MethodsTheHPLCsystemconsistedofODS-C18column（25mm×4.6mm,5μm）,methanol:0.4%sodiummixtureasamobilephase,detection,1ml·min-1offlontemperatureat25℃.ResultsThelinearrangeoflu

3、teolinandapigeninethodissimple,accurate,sensitiveandreproducible.ThismethodcanbeusedforthequantitativedeterminationofflavonoidsinPterissemipinnataL.KeyipinnataL.;Flavonoids;HPLC半边旗PterissemipinnataL.为凤尾蕨科凤尾蕨属植物，广泛分布于四川及长江以南各省区，味苦、辛，性凉，具疏散风寒、化湿消肿、清热解毒等功效［1］。半边旗全草含黄酮类化合物［1

4、，2］，傅玉萍等［3］检测了半边旗中总黄酮的含量，黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等作用［4］。为了进一步明确半边旗中黄酮类化学成分，本文采用高效液相色谱法分析测定了半边旗中木犀草素和芹菜素的含量。1仪器与试药1.1仪器美国惠普公司HP1100高效液相色谱仪；瑞士梅特勒公司AE240型电子分析天平。1.2试药黄酮标准品：木犀草素(luteolin；5,7,3',4'TETRAhydroxyflavone)、芹菜素(apigenin；5,7,4'trihydroxyflavone)，由天津尖峰公司提供（含量大于98%）

5、，甲醇为一级色谱纯，其它试剂均为分析纯；半边旗样品200205采于广州市郊，由广东海洋大学扬燕君副教授鉴定。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为ODSC18分析柱（25mm×4.6mm,.freel）；流动相为甲醇-0.4%的磷酸水溶液（1∶1）；DAD检测器，检测波长345nm，流速1ml·min-1，柱温为25℃。2.2供试品溶液的制备半边旗药材经过粉碎，过40目筛，称取该粉末约2.0g，加20ml甲醇，80℃下水浴加热回流2次，2h/次。过滤，合并滤液，移入25ml容量瓶中，定容，取该溶液少量用0.45μm的微孔滤膜过滤，作为供试

6、品溶液，备用。2.3对照品溶液的制备称取木犀草素对照品2.50mg，加甲醇定容至25ml，作为储备液。称取芹菜素对照品2.50mg，加甲醇定容至25ml，作为储备液。取两种储备液各15ml，加甲醇45ml，制成木犀草素、芹菜素浓度均为0.02μg·μl-1的对照品混合液，作为对照品溶液。2.4线性关系考察精密吸取对照品溶液1，2.5，5，10，20μl依次进样，按照上述色谱条件测定峰面积，木犀草素的峰面积分别为68.30，168.95，331.70，698.26，1415.26；芹菜素的峰面积分别为74.91，161.53，346.67

7、，743.72，1509.54。以峰面积(Y)和质量（X）进行回归。求得回归方程见表1。表1回归方程与线性范围（略）2.5精密度实验精密吸取木犀草素和芹菜素分别为0.02μg·μl-1的对照品溶液10μl，重复进样5次，对照品木犀草素峰面积的平均值为699.53，RSD=0.86%，芹菜素峰面积的平均值为742.83，RSD=1.75%。2.6稳定性实验取样品供试液分别在0，2，4，6，8h测定，结果表明在测定条件下，于8h内测定结果稳定，木犀草素和芹菜素RSD分别为2.50%，2.74%。2.7重现性实验按样品测定法测定，对同一批半边

8、旗样品测定5次，木犀草素和芹菜素平均含量分别为0.2408，0.2116mg·g-1，RSD分别为2.20%，2.46%。2.8加样回收率实验精密称取已知含量的半边旗样品，再精密加入浓度均为0.02μg·μ