高效液相色谱法测定肾宁颗粒中黄芪甲苷的含量论文

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1、高效液相色谱法测定肾宁颗粒中黄芪甲苷的含量论文【摘要】目的：建立肾宁颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法:采用C18(4.6mm×250mm，5μm)柱,流动相为乙腈水冰醋酸(30:70:1)，检测波长为202nm。结果：黄芪甲苷在15-300μg范围内线性关系良好，相关系数r=0.9995，平均回收率为97.95%，RSD为0.40%。结论：此测定方法准确，重现性好，可作为制剂的质量控制方法。【关键词】肾宁颗粒/化学合成;黄芪甲苷/标准;高效液相色谱法;含量测定肾宁颗粒由黄芪、党参等４味中药组成.

2、freell含黄芪甲苷0.15mg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备取本品20g，研细，精密称定，加甲醇100ml，称定重量，加热回流提取2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液50ml，水浴浓缩至约5ml，加水15ml，加到D101型大孔吸附树脂柱(内径1.4cm，长15cm)上，用水200ml洗脱，弃去水洗脱液，再用30%乙醇200ml洗脱，弃去30%乙醇洗脱液，继续用70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液200ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释

3、至刻度，摇匀，即得。2.3检测波长选择精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，于200-400nm波长下测定光谱图，在202nm处有最大吸收峰，检测波长选定为202nm。2.4色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈－水－冰醋酸(30:70:1)为流动相；检测波长202nm；流速1ml/min。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000［2，3］。在上述色谱条件下，对肾宁颗粒样品、黄芪甲苷对照品、阴性对照样品进行测定，结果表明，黄芪甲苷与杂质峰没有重叠，分离效

4、果较好。3结果3.1黄芪甲苷线性关系考察精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇分别制成每1ml含黄芪甲苷对照品1.5、7.5、15、22.5、30μg的溶液，分别吸取10μl,注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标(Y)，以浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，回归方程y=4856.4x＋199431.6，r=0.9995。黄芪甲苷在15-300μg范围呈良好的线性关系。3.2精密度试验取同一批供试品，按2.2中方法制备供试品溶液，由不同操作人员，在不同时间，使用不同高效液相色谱仪，测定黄芪甲苷含量。结

5、果3组样品含量的RSD为0.78%，表明样品含量测定方法有良好的精密度。3.3稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0，2，4，10，16、24h进样，测定峰面积，其黄芪甲苷的RSD为0.52%，表明供试品溶液中黄芪甲苷在24h内稳定。3.4重复性试验取同一批样品，称取6份，按照2.2中方法制备供试品溶液，按2.4中色谱条件测定，其RSD为0.34%，表明样品中黄芪甲苷的含量测定重复性良好。3.5回收率试验取已知含量供试品(0.075mg/g)约10g,6份，分别加入6只具塞锥形瓶中，再精密量取黄芪甲苷对

6、照品溶液(浓度为0.1528mg/ml)5ml,分别加入上述6只锥形瓶中，按2.2中方法制备供试品溶液，按2.4中色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。3.6样品的含量测定按2.2中方法制备供试品溶液，按2.4中色谱条件对3批样品进行含量测定，结果见表2。表1黄芪甲苷回收率(n=2)编号样品称4讨论4.1在黄芪甲苷提取分离条件试验中，曾采用有机溶剂萃取，易乳化，黄芪甲苷损失较大，后改用D101大孔树脂去处杂质，含量较高，操作简便，重现性也较好。4.2由液相图谱表明：按处方比例制备缺黄芪的阴性对照样品，

7、在黄芪甲苷保留时间的相应位置上无黄芪甲苷峰出现，阴性对照无干扰，此方法专属性强，且分离效果好，方法准确可靠，可用于肾宁颗粒的质量控制。【