高效液相色谱法测定补元合剂中黄芪甲苷含量.pdf

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1、浙江l床医学2014年6月第16卷第6期·997·测定补元合剂中黄芪甲苷含量桑明敏何亦溪补元合剂是一种治疗因放、化疗所致白细胞减少常用的中药复方制剂，由黄芪、生地、枸杞、白术、山药、杜仲、牛膝等组成，具有补中益气、扶正固本的功效。黄芪为补气药(合剂中含黄芪50g／1000m1)，性甘温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿、收敛之功效，是补元合剂中的君药。黄芪的主要有效成分是甲苷，保证黄芪甲苷的含量才能提高补元合剂的药效。所以，测定黄芪甲苷含量有重要临床意义。作者采用高效液相色谱法测定黄芪甲苷含量，方法简便，结果准确，重复性好。报告如下

2、。1材料与方法1．1仪器、试药VafianProstar高巷效目液相色谱仪，包0如0括Vafian380蒸发光散射检测m器，瑚230如三元0泵，4珈10啪自如0IN考l00动进样器，Varian色谱工作站；SartoriousBP211D型名如1／100000电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；KQ一500DE型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。Minm00黄芪甲苷对照品(批号：110781—200613)，购自中国C图1黄芪甲苷含量测定色谱图药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯(Merck公司)，A黄芪甲苷对照品色谱图：B

3、样品色谱图；C缺黄芪样品色谱图水为超纯水，其它试剂均为分析纯。补元合剂(本院数：漂移管温度90．0℃，载气流速1．6groin，检测波长自制，批号20120801、20120905、20121010)。380nm，理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000；分1．2溶液的制备(1)对照品溶液制备：精密称取减别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各压干燥至恒重的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每201注入色谱仪。结果表明，黄芪甲苷峰与其他峰分lml含0．529mg的溶液，作为对照品储备液。(2)供离完全阴性供试品溶液在黄芪甲苷出峰

4、位置无干扰。试品溶液的制备[1]：精密量取本品80ml(合剂中含黄1_4方法学考察(1)线性关系考察：精密称定80cc芪50g／1000m1)，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每减压干燥至恒重的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成次60ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每每lml含245．8g的溶液。分别精密吸取0．5、1．0、1．5、次30ml，弃去氨试液，取正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2．0、2．5、3．0ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度。溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密吸取20l，分别注入液相色谱仪

5、，按选定色谱滤过，取续滤液，即得。(3)阴性对照液制备：按处条件测定，测得峰面积。对峰面积与进样量进行双对方比例制成不含黄芪本品，照供试品溶液制备方法制数直线回归处理。即以进样量的对数与峰面积积分值备阴性对照液。与对照品色谱相应的位置上有着相同的对数作线性关系。得回归方程Y=0．9867X+1．5545，保留时间的色谱峰，而阴性溶液在此保留时间无色谱相关系数r=-0．9907。结果表明，黄芪甲苷进样量在峰出现，表明无其它成分干扰峰。见图1。0．2458～1．4748LLg之间呈良好的线性关系。(2)精密1．3色谱条件与系统适用性试

6、验色谱柱：Varian度试验：精度吸取对照品溶液10l，连续进样6次，(150mm×4．6mm，5m)。流动相：乙腈一水(32：测定峰面积，计算平均相对标准偏差(RSD)，结果68)，流速1．0ml／min；蒸发光散射检测器(Varian)参RSD为1．25％，<3％，表明本法精密度良好，结果可靠。(3)稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h按上述色谱条件进行测定。结果供作者单位：310004杭州市下城区中西医结合医院(桑明敏)试品中黄芪甲苷峰面积值的RSD为0．67％(n=6)，结3100057杭州市中医

7、医院(何亦溪)·998·浙江临床医学2014年6月第16卷第6期果表明供试品溶液在12h内基本稳定。(4)重复性试动相，依据色谱分离情况以及出峰时间等实验结果对验：精密称取同一批样品(批号：20120801)，按上述不同流动相进行了考察，结果显示采用乙腈一水(32：色谱条件，连续进样测定6次，结果黄芪甲苷的峰面68)为流动相时，流动相系统分离效果较好，峰形基积的RSD为0．61％，表明本法重复性良好。(5)加样本对称，保留时间合适，杂质峰达到基线分离．阴性回收试验：精密量取批号为20120801的已知含量补元无干扰，因此选择乙腈一

8、水(32：68)，流速1．0ml／合剂样品30ml，共6份，各精密加入一定量的黄芪甲min选择为最佳流动相。苷对照品，照供试品溶液制备方法制备待测溶液。测本资料显示，用HPLC—ELSD法测定补元合剂中定，计算回收率，平均回收率为97．85％(n=