高效液相色谱法测定咽宝合剂中连翘苷的含量论文

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1、高效液相色谱法测定咽宝合剂中连翘苷的含量论文【摘要】目的制备咽宝合剂并对其进行质量控制。方法运用薄层色谱法鉴别连翘；采用高效液相色谱法进行连翘苷的含量控制，色谱柱为EclipseXDB-C18柱（250mmX4.6mm，5μm）,.freel。结果在0.1～0.5g/L浓度范围内连翘苷呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.01%，RSD=0.86%(n=5)。结论本制备工艺简便可行，含量测定快速准确.freell）；试剂均为分析纯。2处方与制备2.1处方鱼腥草6200g，石膏（打碎先煎）6200g，连翘1800g，蒲公英6200g，紫苏叶1800g，芦根1

2、800g，桑叶3100g，黄芩1800g，甘草920g，防腐剂适量，共制成10000ml。2.2制备取含有挥发性成分的饮片，用水适量浸泡，充分湿润后，加水过药面，煮沸后保持微沸约15min，滤过，滤液另器保存，取其它饮片，加水浸泡，充分湿润后，与上述药渣合并，加水过药面2～4cm，煎煮2次，第1次保持微沸1～2h，第2次0.5～1h，时加搅拌，以煮透为度。用100目筛滤过，合并两次滤液，放置沉淀12h以上，取上清液浓缩至适量，加入上述另煎保存的滤液，趁热加入防腐剂，搅匀，使成全量，分装，即得。3质量控制3.1性状本品为棕褐色液体，味苦而甜。3.2鉴别取本品1ml，

3、加甲醇5ml，振摇使溶解，静置，取上清液，作为供试品溶液。另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，置水浴上加热回流20min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法［１］试验，吸取上述两种溶液各5μm，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄板上，以氯仿—甲醇（5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。3.3检查应符合合剂项下有关的各项规定［２］。3.4含量测定本合剂的连翘中所含的有效成分连翘苷，在高效液相色谱柱分离中很容易和连翘中乃至样品中所含其它

4、成分分开，其化学性性质稳定，在277nm紫外区有最大吸收［３］，重现性较好。因此，我们选择了连翘苷作为指标成分，应用高效液相色谱法进行含量测定，从而有效控制咽宝合剂的内在质量。3.4.1色谱条件：色谱柱：EclipseXDB-C18柱（250mmX4.6mm，5μm）；流动相：氯仿—甲醇（6：1）；检测波长：277nm；流速：1ml/min，柱温：30℃；进样量10μl。3.4.2标准曲线的绘制：精密吸取连翘苷对照品10mg置于10ml容瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度制成1g/L的连翘苷对照品溶液。精密吸取1g/L的连翘苷对照品分别稀释配成0.1,0.2,0.3,

5、0.4,0.5（lg/L）的连翘苷对照品溶液，分别进样10μl，每个浓度重复6次，测定每个浓度的平均色谱峰面积积分值（A）与连翘苷浓度（C）之间的回归方程为C=7.16X10-8+6.02X10-3，r=0.999。线性回归曲线说明在0.1～0.5g/L浓度范围内连翘苷浓度与色谱峰面积积分值呈良好的线性关系。3.4.3对照品溶液的配制：精密称取连翘苷对照品加甲醇溶液制成每1ml含0.82mg的溶液。3.4.4供试品溶液的制备：精密量取咽宝合剂20ml，离心过滤，置于50ml圆底烧瓶中，加入氯仿分3次水浴回流萃取，每次萃取20min左右。合并3次氯仿液，水浴蒸干，用甲醇转移至

6、带塞刻度试管中，蒸干甲醇，精密取1ml甲醇溶解残渣，即得供试品溶液。3.4.5阴性对照溶液的制备：照处方比例自行制备不含连翘苷的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制备。以上三种溶液按上述色谱条件进样，测定结果表明：阴性对照在连翘苷峰相应的保留时间处无干扰。3.4.6精密度试验：精密吸取供试品溶液，按上述色谱条件，测定其中连翘苷的含量，连续进样5次，每次10μl，测定峰面积，结果RSD=1.07%。3.4.7回收率实验：精密吸取已知含量的供试品样品2ml，分别精密加入0.1g/L的lml标准品溶液1ml，摇匀后按含量测定方法测定其中连翘苷的含量，结果平均回收率为99.01%

7、，RSD=0.86%（n=5）。3.4.8样品测定结果：按上述方法，测定3批样品连翘苷的含量分别为6.2103、6.1376、6.2201lg/L。4讨论采用本法测定咽宝合剂中连翘苷的含量，方法稳定可靠，重现性好，可作为控制本制剂质量的有效方法。