高效液相色谱―蒸发光散射测定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量

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1、高效液相色谱―蒸发光散射测定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量　　关键词：杞黄颗粒；高效液相色谱蒸发光散射；黄芪甲苷　　DeterminationofAstragalosideⅣinQihuangGranulesbyHPLCELSD　　ZHONGHua，LIYi，ZHOUShufang，ZHANGDan　　(CollegeofPharmacy，ChengduUniversityofT.C.M，Chengdu610075，China；MedicamentSection,NorthSichuanMedicalColle

2、ge，Nanchong637007，China；DepartmentofPharmacy,LuzhouMedicalCollege，Luzhou646000，China)　　Abstract：ObjectiveTodetermineastragalosideIVinQihuangGranulebyHPLCELSD．MethodsHPLCELSD-packC18ODSchromatographycolumnandacetonitril-obilephase．Thefloobilephasel/min．The

3、drifttubetemperatureethodissimple，reliable，accurateandcanbeusedasthequalitycontrolmethodofQihuangGranule．　　KeypackC18ODS（5μm，150mm×4.6mm）色谱柱，流动相：乙腈水(32∶68)，柱温：30℃；检测器参数：漂移管温度：40℃，气流压强：4.1Bar气流量；流速：1.0ml/min。　　2.2对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品5.09mg，置10ml量瓶中，甲醇定容，配成0

4、.509mg・ml-1的对照品溶液。　　2.3供试品溶液的制备精密称取供试品5g，至100ml的具塞锥形瓶中，各加入甲醇溶液50ml，采用超声（功率500in的方法对样品进行提取，放冷，过滤，合并滤液，滤液水浴挥干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干用甲醇溶解并转移至5ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，弃去初滤液，续滤液即可作为供试品溶液［1］。　　2.4空白实验空白实

5、验的制备是取除去黄芪的杞黄颗粒处方药材，按其工艺制成阴性对照颗粒，再按供试品溶液的制备方法制备并测定，结果空白溶液在与黄芪甲苷对照品相同保留时间处无色谱峰，故认为无干扰。见图1。　　2.5线性关系精密吸取对照品溶（0.509mg・ml-1）4，6，8，10,15μl，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量的常用对数X为横坐标，峰面积积分值的常用对数Y为纵坐标，得回归方程：Y=1.614X+4.2577，r=0.9996(n=5)。结果表明：黄芪甲苷在2.036～7.635μg范围内线性关系

6、良好。　　2.8重复性实验取同一批供试品5份(批号为060406)，制备样品供试液，分别进行测定，黄芪甲苷含量平均值为0.396mg・g-1，RSD=2.145％，本法有较好的重复性。　　2.9加样回收率实验取同一批号(批号060406)杞黄颗粒，分别精密称取9份，并精密加入浓度为0.509mg・ml-1的黄芪甲苷对照品溶液适量，制备供试品溶液，按“供试品溶液的制备”项下处理并测定，结果平均加样回收率为97.55％，RSD为2.02％，见表1。　　图1色谱图（略）　　表1杞黄颗

7、粒回收率实验结果（略）　　2.10样品测定精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，按外标双点校正法测定含量。批样品测定结果见表2　　表2杞黄颗粒的含量测定结果（略）　　由上表知,成品含量的均值为0.4039mg・g1，但考虑到药材的，炮制加工，制剂生产及储存等因素，故暂定本颗粒每克黄芪甲苷含量不得少于0.3mg。　　3讨论　　3.1检测方法的选择本研究曾采用薄层扫描法、HPLC紫外检测法以及HPLCELSD法测定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量，实验表明采用薄层扫描法和HPLC紫外检测法其精密度、

8、稳定性、重现性、回收率实验均不及HPLCELSD法好，薄层扫描法因受薄层板厚度、均匀度、薄层展开环境，显色条件等诸多因素的影响其重现性尤难达到要求，而HPLC-紫外检测法对于仅有末端吸收的皂苷类化合物，因其吸收强度较弱，所以很难达到基线分离，其稳定性，准确度因此受限［2］。而采用HPLCELSD法其蒸发光散射检测器适于仅有末端吸收或无紫外吸收的皂苷类化合物的测定，它不依赖于样品的光学特性，不受官能团的影响，任何挥发性低于流动相