高效液相色谱蒸发光散射检测法测定人参根中人参皂苷的含量

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1、万方数据第34卷2006年2月分析化学(FENⅪHuAXUE)研究简报ChineseJoumalofAnalyticalChemistry第2期243—246高效液相色谱．蒸发光散射检测法测定人参根中人参皂苷的含量石威1王玉堂1权新军1白立飞1张华蓉1陈晓东2丁兰¨张寒琦11(吉林大学化学学院，长春130012)2(吉林大学测试中心，长春130023)摘要应用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HP附ELsD)系统和微波辅助萃取技术，采用梯度洗脱的方法研究了人参根中人参皂苷的萃取和分离测定；同时研究了人参皂苷含量随人参年龄的变化。结果表明，该方法快速，简单，分离测定准确，可靠。人参皂苷浓度在0．0

2、25—0．500∥L的范围内与信号强度值成线性关系；加样回收率为85％～104％；日内精密度≤2．60％；日问精密度≤6．00％。随着人参年龄的增长，人参根中的人参皂苷含量也增加。关键词人参皂苷，高效液相色谱法，蒸发光散射检测器，微波辅助萃取1引言人参(五加科植物Pana)【Ginsengc．A．Mey)作为抗疲劳，镇静和抗胃溃疡药物使用已久。人参主要含有皂苷、脂溶性成分、糖、氨基酸和维生素等成分。大量研究表明，人参皂苷是其主要的有效成分。所含的皂苷元有3种，即原人参二醇型皂苷(pmtopanxdi01)、原人参三醇皂苷(protopana)【tri01)和齐墩果酸(oleallolicac

3、id)。目前，测定人参皂苷的方法很多【1'2J，常用紫外检测器在A=203nm检测，但因皂苷类成分在此波长下吸收较差，梯度洗脱时受试剂影响很大，基线漂移较大。Im蒸发光散射检测器(ELSD)是一种通用型质量检测器，检测不受外部环境的干扰，试剂在检测器中蒸发，不干扰检测，是一种检测人参皂苷类成分的有效方法。Park等"1采用正相NH：基色谱柱，以HPLC／ELSD梯度洗脱的方法分离检测Rgl、Re、Rbl、Rc、Rb2、Rd、R92、R移、雕和Rhl；秦少容等M’也采用HPLC／ELSD法测定红参中的R91和Re的含量。本研究采用反相ODs柱，HPLC．ELsD梯度洗脱的方法同时测定人参根中主

4、要活性成分Rgl、Re、Rbl、Rc、Rb2和Rd的含量。微波辅助萃取法是提取人参皂苷的一种有效方法。该方法与传统的提取方法相比，提取J陕速，操作简单瞪。】。李向高等[81通过重量法测量人参总皂苷，证明了人参根中总皂苷的含量是随人参生长的年龄增长而逐渐增加。实验采用液相色谱分离技术，研究了6种主要人参皂苷成分含量随年龄的变化。2实验部分2．1仪器与试剂1100高效液相色谱仪(美国AiIgent公司)；SEDEX75型ELsD(法国迪马公司)；JS—3050色谱工作站(大连江申)；wR—c微波样品处理系统(北京盈安科技有限公司)；Heidolph旋转蒸发仪。人参皂苷标准品R91、Re、Rbl、

5、Rc、Rb2和Rd(中国药品生物制品检验所)；乙腈(HPLC级试剂)；实验用水为二次蒸馏水；其他试剂均为分析纯。生药人参采集自吉林省长白山靖宇县，人参根的年龄为1～5年。2．2实验方法2．2．1标准品溶液的配制取6种标准品R91、Re、Rbl、Rc、Rb2和Rd各适量置于10mL容量瓶中用甲醇定容，得到浓度分别为O．5155、0．5075、O．5188、o．5071、O．5070和0．5036g／L混和标准品储备液。2．2．2供试品溶液的制备(1)微波辅助萃取准确称取人参根样品(过o．9mm孔径筛)0．50g，置2005舭_20收稿：2005_08-24接受本文系吉林大学“创新基金”和吉林省

6、科技发展计划项目(No．20050560)万方数据分析化学第34卷于萃取罐中，加50mL70％乙醇溶液，将萃取罐置于微波样品处理系统中，设定萃取罐压力为500kPa，微波提取时间15min，启动微波炉，萃取完成后，冷却至压力为大气压或接近大气压时，取出萃取罐，将样品液过滤，少量水洗涤萃取罐，滤液减压蒸发至无乙醇味，浓缩液加30mL水，转移至分液漏斗中，溶液用20mL乙醚脱脂，反复两次，并用少量水洗涤乙醚相，弃去乙醚相，合并水相，再用水饱和的正丁醇15mL萃取，反复3次，合并正丁醇液，减压浓缩至干，残渣用甲醇溶解，定容至10mL。(2)药典方法旧1取本品粉末(过0．9mm孔径筛)精确称定0．5

7、0g，置索氏提取器中，加氯仿40mL，加热回流3h，弃去氯仿液，药渣挥去氯仿，连同滤纸筒移人具塞锥形瓶中，精确加人水饱和的正丁醇50mL，密塞，放置过夜，超声处理30min，滤过，并用少量的蒸馏水洗涤，滤液全部转移至250mL的烧瓶中，减压浓缩至干，残渣加甲醇溶解并转移至lOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。2．2．3色谱条件色谱柱PinnacleⅡc，8(4．6mm×250mm，5肛m)，进样体积20止，柱