人参茎叶皂苷中人参皂苷re含量的反相高效液相色谱测定方法的改进

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1、人参茎叶皂苷中人参皂苷Re含量的反相高效液相色谱测定方法的改进【摘要】  目的改进高效液相色谱法测定人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的方法。方法最佳色谱条件:ODS(150mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,采用梯度洗脱(乙腈与水),检测波长203nm,流速1.0ml/min。结果人参皂苷Re的回归方程为Y=9505.4488X-1159.6070,r=0.9998,线性范围为1.88~60.16μg/ml,平均回收率为99.35%(RSD=0.49%,n=6)。结论采用改进的测定方法简单、准确和重现性好,适合人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的质量控

2、制。【关键词】人参茎叶皂苷;人参茎叶皂苷Re;反相高效液相色谱  Abstract:ObjectiveToimprovetheHPLCmethodfordeterminationofginsenosidReinginsenosides.MethodsODScolumn(150mm×4.6mm,5μm)obilephaseconsistedofCH3-H2O,thedetection,andtheflol/min.ResultsTheregressionequationofginsenosideRel,theaveragerecoveryo

3、fginsenosidReethodissimple,quick,andreproducibleanditissuitableforthequalitycontrolofPanaxginseng.  Key-packVP-ODS分析柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水;流速1.0ml/min;检测波长203nm;柱温:35℃;梯度条件见表1。  表1流动相的梯度洗脱(略)  在上述色谱条件下,人参皂苷Re与杂质完全分离,人参皂苷Re的保留时间约17min(图1~3),理论塔板数按人参皂苷Re峰计算大于2500。  图1空

4、白溶液高效液相色谱图(略)  图2人参皂苷Re对照品溶液高效液相色谱图(略)  图3样品溶液高效液相色谱图(略)  2.2对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品5mg(真空干燥至恒重)置25ml量瓶中,加少量甲醇,超声溶解30min,待溶液恢复常温后,用甲醇稀释至刻度,用0.22μm的微孔滤膜过滤溶液备用。  2.3线性关系考察精密吸取上述人参皂苷Re对照品溶液,分别进样0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0μl,按上述色谱条件测定峰面积。以人参皂苷Re对照品进样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。经线性回归,人

5、参皂苷Re的回归方程为:Y=9505.4488X-1159.6070,r=0.9998,在1.88~60.16μg/ml范围内线性关系良好。  2.4精密度实验对含人参皂苷Re低、中、高3种浓度的标准溶液,于同日内分别测定6次,并对上述3种浓度的标准溶液于不同天分别测定6次。结果见表2。  2.5稳定性实验吸取同一供试样品溶液分别于0,4,6,8h及第1,2,4天后分别测定结果RSD分别为0.63%,1.13%,表明该样品溶液3d内稳定。  2.6重复性实验取同一批号样品(20070401批号),照“2.2”项下方法制备6份,分别测定,计

6、算RSD为0.52%。  表2日内及日间差异实验结果(略)  2.7加样回收率实验采用加样回收法。分别精密称取已测知含量的样品(含量人参皂苷Re12.2%)约10mg,共计6份,每2份为1组,每组分别加入18.80μg/ml的人参皂苷Re对照品1,5,10ml,精密加甲醇至50ml,密塞、超声提取30min,放冷,用甲醇补足失重,用0.22μm滤膜过滤,测定实际含量,计算回收率,结果见表3。  表3回收率实验结果(略)  2.8供试品溶液的制备取(20070401批号)样品,按“2.2”项下供试品溶液的制备方法,以人参皂苷Re含量为优选指

7、标,分别超声处理15,30,45min。结果表明超声处理30min为最佳提取时间。  取供试品约10mg,精密称定,至25ml量瓶中加甲醇,超声溶解30min,待溶液恢复常温后,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.22μm滤膜过滤,即得。  2.9样品测定按“2.2”项的方法进行处理3批样品,照上述色谱条件,反复进样6次。结果见表4。  表4样品含量测定结果(略)  3讨论  为了提高分离效能,本实验采用梯度洗脱的方法。流动相比例的确定:在上述色谱条件下,本实验对流动相A相、B相分别选择了不同比例的甲醇与水(磷酸溶液)、乙腈与水和多种梯度条件进

8、行试验。结果证明,流动相选择乙腈与水进行梯度洗脱,人参皂苷Re与杂质分离效果最好。  该方法灵敏、准确可靠,可以作为人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的含量测定方法。【参考

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