人参茎叶皂苷中人参皂苷re含量的反相高效液相色谱测定方法的改进

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1、人参茎叶皂苷中人参皂苷Re含量的反相高效液相色谱测定方法的改进【摘要】　　目的改进高效液相色谱法测定人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的方法。方法最佳色谱条件：ODS（150mm×4.6mm，5μm）为色谱柱，采用梯度洗脱（乙腈与水），检测波长203nm，流速1.0ml/min。结果人参皂苷Re的回归方程为Y=9505.4488X－1159.6070，r＝0.9998，线性范围为1.88～60.16μg/ml，平均回收率为99.35%(RSD=0.49%,n=6)。结论采用改进的测定方法简单、准确和重现性好，适合人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的质量控制。【关键词】人参茎叶皂苷；人参茎叶皂苷Re；反相高

2、效液相色谱　　Abstract：ObjectiveToimprovetheHPLCmethodfordeterminationofginsenosidReinginsenosides.MethodsODScolumn（150mm×4.6mm，5μm）obilephaseconsistedofCH3-H2O,thedetection，andtheflol/min.ResultsTheregressionequationofginsenosideRel,theaveragerecoveryofginsenosidReethodissimple,quick,andreproducibleandi

3、tissuitableforthequalitycontrolofPanaxginseng.　　Key-packVP-ODS分析柱（150mm×4.6mm,5μm）；流动相为乙腈－水；流速1.0ml/min；检测波长203nm；柱温：35℃；梯度条件见表1。　　表1流动相的梯度洗脱（略）　　在上述色谱条件下，人参皂苷Re与杂质完全分离，人参皂苷Re的保留时间约17min（图1～3），理论塔板数按人参皂苷Re峰计算大于2500。　　图1空白溶液高效液相色谱图（略）　　图2人参皂苷Re对照品溶液高效液相色谱图（略）　　图3样品溶液高效液相色谱图（略）　　2.2对照品溶液的制备精密称取人参皂苷R

4、e对照品5mg（真空干燥至恒重）置25ml量瓶中，加少量甲醇，超声溶解30min，待溶液恢复常温后，用甲醇稀释至刻度，用0.22μm的微孔滤膜过滤溶液备用。　　2.3线性关系考察精密吸取上述人参皂苷Re对照品溶液，分别进样0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0μl，按上述色谱条件测定峰面积。以人参皂苷Re对照品进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。经线性回归，人参皂苷Re的回归方程为：Y=9505.4488X－1159.6070，r＝0.9998，在1.88～60.16μg/ml范围内线性关系良好。　　2.4精密度实验对含人参皂苷Re低、中、高3种浓度的标准溶液，于

5、同日内分别测定6次，并对上述3种浓度的标准溶液于不同天分别测定6次。结果见表2。　　2.5稳定性实验吸取同一供试样品溶液分别于0，4，6，8h及第1，2，4天后分别测定结果RSD分别为0.63%，1.13%，表明该样品溶液3d内稳定。　　2.6重复性实验取同一批号样品（20070401批号），照“2.2”项下方法制备6份，分别测定，计算RSD为0.52％。　　表2日内及日间差异实验结果（略）　　2.7加样回收率实验采用加样回收法。分别精密称取已测知含量的样品（含量人参皂苷Re12.2%）约10mg，共计6份，每2份为1组，每组分别加入18.80μg/ml的人参皂苷Re对照品1，5，10ml

6、，精密加甲醇至50ml，密塞、超声提取30min，放冷，用甲醇补足失重，用0.22μm滤膜过滤，测定实际含量，计算回收率，结果见表3。　　表3回收率实验结果（略）　　2.8供试品溶液的制备取（20070401批号）样品，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法，以人参皂苷Re含量为优选指标，分别超声处理15，30，45min。结果表明超声处理30min为最佳提取时间。　　取供试品约10mg，精密称定，至25ml量瓶中加甲醇，超声溶解30min，待溶液恢复常温后，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤膜过滤，即得。　　2.9样品测定按“2.2”项的方法进行处理3批样品，照上述色谱条件，反复进样

7、6次。结果见表4。　　表4样品含量测定结果（略）　　3讨论　　为了提高分离效能，本实验采用梯度洗脱的方法。流动相比例的确定：在上述色谱条件下，本实验对流动相A相、B相分别选择了不同比例的甲醇与水(磷酸溶液)、乙腈与水和多种梯度条件进行试验。结果证明，流动相选择乙腈与水进行梯度洗脱，人参皂苷Re与杂质分离效果最好。　　该方法灵敏、准确可靠，可以作为人参茎叶皂苷中人参皂苷Re的含量测定方法。【