反相高效液相色谱法测定炎可宁中黄芩苷的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定炎可宁中黄芩苷的含量论文.freelasilC18(4.6mm×150mm,5μm)；流动相为甲醇-水-磷酸（60∶40∶0.2）；检测波长：280nm；流速：1.0mlmin-1；柱温：30℃。结果建立了对炎可宁片中黄芩苷进行定量的测定方法，并将此方法用于3个不同厂家生产的炎可宁片中黄芩苷含量的测定。结论为中药复方提供了更加简便、合理、可靠的质控方法。关键词：反相高效液相色谱法；炎可宁；黄芩苷DeterminationofBaicalininYankeningbyRP-HPLCAbstract：ObjectiveTodeterminethebioactiv

2、epound'scontentofbaicalininYankening.MethodsRP-HPLC,KromasilC18column(4.6mm×150mm,5μm)ethanol-obilephase.Theflol/min,thecolumntemperature.ResultsThismethodinebaicalininYankeningproducedbydifferentfactoriessuccessfully.ConclusionThisisamoreconvenient,reasonableandcrediblequalitycontrolmethodfo

3、rtheChinesetraditionalmedicine.Keyg置于50ml容量瓶中，用50％甲醇进行溶解，并超声处理20min，水浴（50℃）10min，冷却至室温，再用50％甲醇定容至50ml，摇匀，即得0.5mg/ml的黄芩苷贮备液。准确吸取贮备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml，分别置于10ml容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，所得对照品的浓度分别为25，50，100，150，200μg/ml。样品溶液的制备：精密称取除去糖衣的3个厂家的炎可宁样品，加入甲醇30ml，超声处理20min，放置至室温，再用离心机以3500r/min的速度离心15min，取离心

4、液5.0ml，用甲醇稀释至10ml，即得样品溶液。2.2色谱和检测条件色谱柱：KromasilC18分析柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：甲醇水磷酸（60∶40∶0.2）；检测波长：280nm；流速：1.0mlmin-1；柱温：30℃；进样体积：10μl。2.3线性关系的考察在上述条件下，黄芩苷分别在5个浓度点，平行测定3次（均进样10μl）。以峰面积为纵坐标，对照品浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线如图2所示；回归方程为：C=2.9869×10-5A+4.08875,r=0.9995；黄芩苷在25～200μg/ml范围内呈良好的线性关系。2.4精密度实验精密吸

5、取黄芩苷对照品溶液，重复进样5次，每次进样体积为10μl。测定峰面积分别为：5613129，5684194，5537458，5736715，5665029，5647305。RSD为1.3%。2.5回收率试验取已知含量的样品溶液1.0ml，分别加入对照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml，按样品测定法，用上述色谱条件测定，所得结果见表1所示，表明回收率良好，满足定量要求。表1加样回收率实验结果（略）2.6样品中黄芩苷含量测定将样品溶液经0.45μm滤膜过滤直接进样，分别定量测定黄芩苷的含量。结果见表2。表23种炎可宁中黄芩苷的含量（略）三种样品的色谱图如图2~5所示。图

6、2黄芩苷标准曲线（略）图3样品1的HPLC图（略）图4样品2的HPLC图（略）图5样品3的HPLC图（略）3讨论3.1由于黄芩苷在水和甲醇中的溶解度较小［1］，因此配制黄芩苷标液时，其浓度不宜过大，为了加速溶解，最好经超声处理，而且要将样品研细，并要不断振荡。3.2在配制黄芩苷标样的过程中，曾经尝试用不同的溶剂来溶解黄芩苷，分别为甲醇水冰醋酸（47∶53∶0.1），甲醇水磷酸（60∶40∶0.2），甲醇（分析纯），50％甲醇，经过比较，得出由50％甲醇溶解效果最好，由此而得的标准曲线的线性范围最好。3.3流动相：以甲醇水冰醋酸（47∶53∶0.1）和甲醇水磷酸（60∶40∶0.2

7、）进行实验对比，得出甲醇水磷酸（60∶40∶0.2）的分离效果较满意。3.4黄芩是炎可宁的主要成分，所含黄芩苷有抗炎、抗菌、解热等作用。因此以黄芩苷为定量监控指标可有效地控制产品质量。中成药中黄芩苷的测定方法很多，如比色法、分光光度法、薄层扫描法、二阶导数光谱法、高效液相色谱法等。本文利用高效液相色谱法测定炎可宁中黄芩苷的含量，通过线性关系的考察、精密度实验、回收率实验等一系列实验，也证明了高效液相色谱法具有速度快、准确性高、分离效果好等优点，所得结果与炎可宁中黄芩苷实际含量基本