反相高效液相色谱法测定竹沥达痰丸中黄芩苷的含量

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1、反相高效液相色谱法测定竹沥达痰丸中黄芩苷的含量【摘要】　　目的建立反相高效液相色谱（RPHPLC）法竹沥达痰丸中有效成分黄芩苷含量的测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱为ZORBAXExtendC18柱(4.6mm×150mm,5μm)，流动相为甲醇水磷酸（47∶53∶0.2），检测波长为316nm。结果黄芩苷线性范围10.04～77.2μg/ml，r=0.9998(n=7)；回收率为100.5%（n=6），RSD为1.22%。结论测定方法简便、稳定，能有效地控制该制剂的质量。【关键词】竹沥达痰丸黄芩苷反相高效液相色谱法　　Abstract：Objecti

2、veToestablishameasurementmethodofbaicalin,theeffectiveponentofZhulidatanPills.MethodsTheisolationn(4.6mm×150mm,5μm),themobilephaseconsistedofmethanol-.ResultsThecontentofbaicalinshol，r=0.9998(n=7),andtheaveragerecoveryethodissimple,stable,andcaneffectivelycontrolthequalityoftheprepara

3、tion.　　Keym×150mm,5μm)色谱柱，G1379A四元泵，G1314AVettlerToledoPB1502-S电子天平，MettlerToledoAG204电子分析天平，超声处理器（上海船舶电子设备研究所）。　　1.2试药　　黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110737200312，供含量测定用）；甲醇（色谱纯）；其余试剂均为分析纯；水为双蒸水。　　1.3样品　　竹沥达痰丸（某药厂批号20060703，20060910，20061112）。　　2方法与结果　　2.1色谱条件与系统适用性实验　　用十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇－水－磷酸

4、（47∶53∶0.2）为流动相；检测波长316nm；柱温室温。理论板数按黄芩峰计算应不低于3000。　　2.1.1对照品溶液的制备　　精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品适量，加50%甲醇制成每毫升含30μg的溶液，即得。　　2.1.2供试品溶液的制备　　取丸剂，研细，精密称取1.8g置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率320in，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.1.3测定法　　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，

5、注入液相色谱仪，测定，即得。　　2.2检测波长的确定　　以50%甲醇水为空白，对黄芩苷标准溶液进行紫外扫描，结果表明黄芩苷在280nm及316nm处有最大吸收，重复测定其在316nm处的吸收度，结果表明在316nm处测定稳定性好，因此液相色谱法中吸收波长确定为316nm。见图1～2及表1。表1黄芩苷标准溶液在λ＝316nm处重复测定的吸收度（略）　　2.3线性关系考察　　对照品溶液的制备：精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品19.3mg，置于250ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为77.2mg/ml的黄芩苷标准品储备溶液，然后依次精

6、密量取浓度为77.2mg/ml的黄芩苷标准储备溶液1.3，2.6，4.0，5.2，6.5，8ml于10ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10.036，20.072，30.88，40.144，50.18，61.76，77.2mg/ml的系列黄芩苷标准溶液。按上述色谱条件分别精密吸取标准品溶液各20μl进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，样品浓度为横坐标回归得标准曲线为：A=40.781C-8.6998，r=0.9998。表明在浓度10.04～77.2μg/ml范围内黄芩苷的峰面积与浓度线性关系良好。黄芩苷标准曲线见图3。　　2.4精密度实验精密吸取供

7、试品溶液20μl进样测定，一天内重复进样操作6次，约1h/次，测得各次峰面积分别为1953.5，1946.2，1929.4，1931.3，1893.2，1878.5计算峰面积的RSD为1.47%，表明样品利用该方法一天内测定精密度满足要求，但含量有下降趋势，提示样品处理后应尽可能短时间内进行分析。　　2.5专属性实验制备缺黄芩的阴性样品，然后同供试品溶液样品处理法同法处理，得到黄芩阴性溶液。分别精密吸取阴性溶液、标准品溶液、供试品溶液20μl，进样测定，记录色谱图，见图4～6。　　从色谱图中可看出阴性样对测定无干扰，制剂中黄芩苷与相邻峰分离良好，理论板数可达300

8、0以上。表