高效液相色谱法测定双黄连注射剂中黄芩苷的方法分析论文

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1、高效液相色谱法测定双黄连注射剂中黄芩苷的方法分析论文翟丽段漓童郭瑞华吴来娣【摘要】目的建立以高效液相色谱（HPLC）法测定双黄连注射剂中组分含量的方法。方法以甲醇-水（10%的磷酸溶液调节pH至2.7）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为326nm，在Diamonsil（钻石）C18(5μm,4.6mm×150mm)色谱柱上洗脱，外标法定量，黄芩苷含量可测定。结果黄芩苷在5.1～81.6μg/ml范围内呈良好的线性关系，r=0.9998，平均加样回收率为100.34%.freelonsil（钻石）C18色谱柱（5μm，4.6mm×150mmCat.no：9990

2、Ser.no：8011571DikmaTechnologies）。1.2试剂双黄连注射液（批号Z23021166黑龙江乌苏里江佳大制药有限公司）；黄芩苷化学标准品（批号110715－200514,中国药品生物制品检定所）；色谱甲醇（天津大茂化学试剂厂）；分析纯甲醇（天津市北方天医化学试剂厂）；磷酸（河北省保定化学试剂厂）。2方法与结果2.1色谱条件Diamonsil（钻石）C18色谱柱（5μm，4.6mm×150mm）,.freell/min，检测波长为326nm，进样量20μl。其分离色谱见图1～2。2.2溶液的制备2.2.1标准品溶液的配制精密称取黄芩苷标准品0.00

3、5100g至50ml容量瓶中，用甲醇（分析纯）定容至刻度，超声至其完全溶解。配制成浓度为0.102mg/ml的储备液放入冰箱，低温储存。2.2.2供试品溶液的配制用0.1ml的移液管从双黄连注射液中精密吸取0.05ml至10ml容量瓶中，用甲醇（分析纯）定容至刻度，超声10min使溶解。再用0.45μm的滤膜过滤至用铬酸洗液浸泡3h并干燥好的10ml比色管中，扭紧塞子。2.3线性关系考察精密量取浓度为0.102mg/ml黄芩苷标准品储备液0.5，1，2，4，6，8ml分别至10ml容量瓶中，用甲醇（分析纯）定容至刻度，配制成浓度为5.1，10.2，20.4，40.8，61

4、.2，81.6μg/ml的一系列标准溶液后，再用0.45μm的滤膜过滤至用铬酸洗液浸泡3h后干燥好的6支10ml比色管中，扭紧塞子。按上述色谱条件进行测定，每个浓度的黄芩苷标准液测3次。根据3次峰面积的平均值，求黄芩苷的标准曲线。结果见表1，黄芩苷在5.1～81.6μg/ml浓度范围内呈良好线性关系。回归方程为Y=41.409X-132.35，r=0.9998。2.4加样回收率测定用1.0ml的移液管从双黄连注射液中精密吸取1ml至100ml容量瓶中，用甲醇（分析纯）定容，并超声10min使其完全溶解。从中吸取5ml至10ml容量瓶中，共5份，各精密加入黄芩苷标准品储备液

5、0.051，0.102，0.204，0.306，0.357，0.510mg，用甲醇（分析纯）定容至刻度，并超声10min使其完全溶解，按上述色谱条件进行测定，根据峰面积，计算黄芩苷含量，并计算黄芩苷的平均加样回收率。结果见表2。表1黄芩苷的线性关系考察实验数据表2黄芩苷的加样回收率实验结果2.5精密度实验取双黄连注射液1支，根据供试品溶液的配制法配制样品溶液1份，按上述色谱条件进行测定，共进样5次。结果见表3。表3黄芩苷的精密度实验结果2.6重现性实验取同一批号双黄连注射液5支，根据供试品溶液的配制法配制样品溶液5份，按上述色谱条件进行测定。结果见表4。表4黄芩苷的重现性

6、实验结果2.7稳定性实验根据供试品溶液的配制法配制样品溶液一份，在室温下放置，分别于0，3，6，9，12h时按上述色谱条件测定一次峰面积，实验结果RSD=1.22％，表明黄芩苷在12h内稳定，结果见表5。表5黄芩苷的稳定性实验结果2.8样品含量测定根据供试品溶液的配制法配制样品溶液，按上述色谱条件进行测定。经实验测得双黄连注射液中黄芩苷的含量为7.1mg/ml。结果见图1～2。3讨论双黄连注射剂的不良反应源自中成药的复杂成分，如金银花中所含有的绿原酸和异绿原酸，不仅具有抗菌抗病毒作用，又具有致敏原作用，可引起变态反应，是引起过敏反应的主要原因之一。童路［2］报道双黄连针剂

7、引起的过敏反应与黄芩苷有关，毒性反应与黄芩中的另一种成分有关。图1黄芩苷化学标准品HPLC图图2样品HPLC图黄芩苷与绿原酸的极性相差极大，在质量标准中也只规定两者含量分别测定，用HPLC法同时测定两者含量，多采用梯度洗脱法逐渐降低流动相极性的方法,而吸收波长一般选择326nm，以提高绿原酸的灵敏度。黄芩苷的HPLC测定，其流动相有甲醇∶水∶冰醋酸(5∶50∶1)；甲醇∶水∶磷酸(50∶50∶0.2)；异丙醇∶甲醇∶3%的醋酸(5∶30∶65)；甲醇∶0.5%三乙胺(75∶25)系统。而在2005年版《中国药典》中黄芩苷的色谱