高效液相色谱法测定双黄连粉针剂中绿原酸和黄芩苷的含量

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1、高效液相色谱法测定双黄连粉针剂中绿原酸和黄芩苷的含量作者：杨瑞芬，彭家钢，周蓉，达世禄，杨志【关键词】双黄连粉针剂；,,绿原酸；,,黄芩苷；,,高效液相色谱法；,,梯度洗脱　　摘要：目的建立高效液相色谱（HPLC）法同时测定双黄连粉针剂中绿原酸和黄芩苷外标定量测定方法。方法用自制C8~C13混合型烷基键合硅胶柱(5μm，4.6mm×150mm)为固定相，甲醇和水溶液（用磷酸调pH2.7）为流动相，在C8~C13柱上梯度洗脱，流速为1ml・min-1，紫外检测波长为323nm。结果绿原酸和黄芩苷的线性范围分别为4.0~100.0mg・ml-

2、1和8.6~215.0mg・ml-1；相关系数分别为0.99989和0.99997；加样回收率分别为100.53%和99.94%；检测限分别为0.014mg・ml-1和0.020mg・ml-1；精密度实验RSD分别为1.12%和0.61%；重现性实验RSD分别为1.14%和0.73%，稳定性实验RSD分别为0.89%和0.54%；4批样品中绿原酸的含量在1.577~1.753mg・ml-1，黄芩苷的含量在26.02~28.68mg・ml-1。结论该方法简便，快速，准确，灵敏度高，重现性好，成本低，

3、可用于双黄连粉针剂的质量控制。　　关键词：双黄连粉针剂；绿原酸；黄芩苷；高效液相色谱法；梯度洗脱　　QuantitativeDeterminationofChlorogenicAcidandBaicalininShuanghuanglianPoethodforthedeterminationofchlorogenicacidandbaicalininShuanghuanglianpoixedalkyl(5μm，4.6mm×150mm)bondsilicaforreversed-phaseHPLCobilephasel/min.Thedetection.Chlorog

4、enicacidandbaicaling/mland8.6~215.0mg/mlrespectively，thecorrelationcoefficientspleitsg/mland0.020mg/ml,theRSD(n=5)ofmeasurementprecisiontestg/ml，andthatofbaicaling/ml.ConclusionThemethodissimple,fast,accurate，sensitive,reproducibleandlo2000BasicEdition色谱工作站软件V2.05和T3000柱温箱（北京创新通恒科技有限公司

5、）组成。KQ-400BD型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），C8~C13混合型烷基键合硅胶色谱柱（自制），PHS-3C精密pH计（上海雷磁仪器厂），TU-1900光度扫描仪。　　1.2药品与试剂双黄连粉针剂（哈尔滨医药股份有限公司，批号0010207，0306201，0402205，0402206）；绿原酸对照品（中国药品生物制品鉴定所生产，批号110753-200212）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号110715-200212）；甲醇（色谱纯，上海化学试剂有限公司），磷酸（分析纯），重蒸馏水。　　2方法与结果　　2.1混合型烷基键合硅胶的制

6、备2.0g经6mol・L-1HCl活化后的干燥硅胶，悬浮在80ml无水甲苯中，加入2.0mlC8~C13烷基三乙氧基硅烷和3滴三乙胺，在氮气气氛中，120℃加热搅拌反应24h，待冷至室温后，抽滤，分别用甲苯、乙醚、丙酮、甲醇、水洗涤多次，120℃下真空干燥2h后称重，得约2.2g固定相。C8~C13混合烷基三乙氧基硅烷是一种石油尾气中的混合烯烃硅氢加成得到的廉价的偶联剂。　　2.2流动相的制备流动相A：测试前，甲醇（CR）用G4玻璃漏斗过滤，然后超声30min，冷却后供测试用；流动相B：取适量重蒸馏水至500ml烧杯中，通过酸度计和电磁搅拌器，用H3P

7、O4(AR)-H2O（1∶9，v/v）溶液调pH2.7，以下操作同流动相A。　　2.3对照品储备液的制备精密称取黄芩苷对照品21.5mg，绿原酸对照品10.0mg，分别置50ml棕色量瓶中，用甲醇-水(1∶1,v/v)溶解定容至50ml，分别配制成浓度为0.43mg・ml-1和0.20mg・ml-1的贮备液，绿原酸置冰箱低温保存。　　2.4样品溶液及空白对照液的制备精密称取双黄连粉针剂15mg置50ml棕色容量瓶中，加入甲醇-水(1∶1,v/v)适量，超声溶解20min，冷却，用甲醇-水(1∶1,v/v)稀释至刻度，摇匀，以3000r