高效液相色谱法测定复方芩兰口服液中绿原酸和黄芩苷

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1、高效液相色谱法测定复方芩兰口服液中绿原酸和黄芩苷【摘要】　　目的建立测定复方芩兰口服液中绿原酸和黄芩苷的含量分析方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为C-18烷基硅烷柱，绿原酸：甲醇-0.4%的磷酸水溶液(24∶76)为流动相，检测波长327nm；黄芩苷：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相，检测波长274nm；流速1.0ml/min，柱温30℃。结果绿原酸在0.118～1.18μg范围内线性关系良好(r=1.0000)，平均加样回收率为97.9%，RSD为2.6%（n=5)；黄芩苷在0.0696～0.55

2、68μg范围内线性关系良好(r=0.9998)，平均加样回收率为98.2%，RSD为1.4%(n=5)。结论该法操作简单、准确、重现性好，可用于复方芩兰口服液的质量控制。【关键词】绿原酸黄芩苷复方芩兰口服液高效液相色谱法　　Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentsofchlorogenicacidandBaicalininfufangqinlanoralsolution.MethodsHPLCedbyusingC-l8column．Thechlorogenicacidetha

3、nol-0.4%phosphoricacidsolution(24∶76)asamobilephaseanddetectedat327nm.Thebaicalinethanol-obilephaseanddetectedat274nm.ResultsThechlorogenicacidhadgoodlinearrelationship(r=1.0000)ethodissimple,accurateandreprodueible.ItcanbeusedforgualitycontrolofFufangqinlanor

4、alsolution.　　Keym×150mm，5μm)；流动相：绿原酸：甲醇-0.4%的磷酸水溶液(24∶76)为流动相；黄芩苷：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相。进样量5μl。流速1.0ml/min；检测波长：绿原酸为327nm，黄芩苷为274nm。柱温30℃。　　3方法与结果　　3.1实验条件的选择　　3.1.1提取剂的选择分别采用体积分数为50%甲醇、体积分数为50%乙醇作为试样提取溶剂，结果表明体积分数为50%甲醇与体积分数为50%乙醇提取结果相似，所以选用体积分数为50%甲醇作为提取溶剂。　

5、　3.1.2流动相的选择曾采用乙腈-水-磷酸(10∶90∶0.1)、甲醇-0.4%的磷酸水溶液(24∶76)和甲醇－水－磷酸(47∶53∶0.2)等作为流动相，结果以最后两种流动相得到的色谱图分离度好，保留时间适宜，所以采用其作为流动相。　　3.2对照品溶液的制备　　精密称取绿原酸对照品5.9mg，置50.00ml棕色容量瓶中，用50%的甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度为0.118mg/ml的对照品溶液。准确称取经干燥的黄芩苷对照品11.6mg，置于50ml容量瓶中，加50%甲醇适量，振摇，超声处理20min使

6、之溶解，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.232mg/ml的对照品储备液。精密量取黄芩苷对照品储备液15ml，置于50ml容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.0696mg/ml的黄芩苷对照品使用液。　　3.3供试品溶液的制备　　3.3.1绿原酸准确移取1ml供试品于10ml比色管中，加入50%的甲醇稀释到刻度线，摇匀，静置，过滤，取续滤液即可。　　3.3.2黄芩苷准确移取1ml供试品于100ml容量瓶中，加入50%的甲醇稀释到刻度线，摇匀，静置，过滤，取续滤液即可。　　3.4阴性溶液的

7、制备称取连翘、板蓝根各10g，加适量蒸馏水，煎熬30min，然后过滤，浓缩，放置，冷却，再加入适量50%的甲醇即可。　　3.5系统适用性实验在上述色谱条件下，分别以绿原酸对照品溶液，绿原酸供试品溶液，黄芩苷对照品溶液，黄芩苷供试品溶液和阴性对照品溶液在色谱仪上进样，记录色谱图（见图1～5）。图中，绿原酸对照品和供试品的保留时间分别为9.067和9.057min，黄芩苷对照品和供试品的保留时间分别为8.352和8.305min，阴性溶液无干扰。　　3.6标准曲线绘制　　3.6.1绿原酸标准曲线绘制取绿原酸对照品溶液(

8、0.118mg/ml)以1，2，4，6，8，10μl在高效液相色谱仪进样,记录色谱图见图6。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。线性回归方程：Y=3×106X+258.08，r=1.0000。线性范围：0.118～1.18μg。　　3.6.2黄芩苷标准曲线绘制取黄芩苷对照品使用溶液(0.0696mg/ml)以1，2，4，6，8μl在高效液相色谱仪