高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、

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1、高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、【摘要】：目的建立同时测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素含量的高效液相色谱法。方法采用VP-ODSC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱；流速：1.0mL/min；检测波长：278nm。结果绿原酸在0.44～6.60μg范围内线性关系良好(r＝0.9991),平均回收率为97.0%；黄芩苷在0.52～6.18μg范围内线性关系良好(r＝0.9991),平均回收率为98.98%；连翘苷在0.20～

2、2.04μg范围内线性关系良好(r＝0.9993),平均回收率为103.55%；汉黄芩素在0.13～1.76μg范围内线性关系良好(r＝0.9991),平均回收率为96.49%。结论本方法简便可行、准确、快速,可用于双黄连口服液中上述4种成分的含量测定。【关键词】双黄连口服液　绿原酸　黄芩苷　连翘苷　汉黄芩素　高效液相色谱法　含量测定　　Abstract：ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofchlorogenicacid,baicalii

3、n,forsythinandnm×4.6mm,5μm).Themobilephaseconsistedofacetonitrile-0.2%phosphoricacidL/minandthedetection.ResultsThecalibrationcurvesethodissimple,practicable,accurateandrapid.Itcanbeappliedtocontentdeterminationofchlorogenicacid,baicaliin,forsythinandm×4.

4、6mm,5μm)；流动相：乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)(A＋B＝100%)作梯度洗脱,t＝0→6min,A：27%；t＝6→10min,A：30%；t＝10→15min,A：60%；t＝15→25min,A：90%；流速：1.0mL/min；检测波长：278nm；柱温：25℃；进样量20μL。在上述色谱条件下,4种待测组分与邻近组分达到了基线分离,理论塔板数按绿原酸峰计算不低于3000。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备　　精密称取绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素对照品适量,置10m

5、L容量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,分别制成浓度为1.10、1.03、0.51、0.44mg/mL的对照品母液。　　2.2.2供试品溶液的制备　　精密吸取双黄连口服液1.0mL,置50mL容量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,0.45μm微孔滤膜过滤,即得。　　2.2.3阴性对照溶液的制备　　按处方比例及制备工艺,分别制备缺金银花、黄芩、连翘的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。　　2.3线性关系考察　　分别精密吸取绿原酸对照品母液0.20、0.40、0.75、1.

6、50、3.0mL,黄芩苷对照品母液0.25、0.50、1.0、2.0、3.0mL,连翘苷对照品母液0.20、0.40、0.60、1.20、2.0mL,汉黄芩素对照品母液0.15、0.25、0.50、1.0、2.0mL,对应加入10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,配制成5个浓度的混合对照品溶液,进样测定,记录色谱图。以峰面积为纵坐标,分别以绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素进样量为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程。绿原酸：Y＝1.04×107X＋1.40×105,r＝0.9996；黄芩苷：Y＝3.87×1

7、06X－1.26×104,r＝0.9999；连翘苷：Y＝6.44×105X＋1.74×104,r＝0.9999；汉黄芩素：Y＝6.30×106X＋1.45×105,r＝0.9999。结果表明,绿原酸进样量在0.44～6.60μg范围内,黄芩苷进样量在0.52～6.18μg范围内,连翘苷进样量在0.20～2.04μg范围内,汉黄芩素进样量在0.13～1.76μg范围内,线性关系良好。　　2.4精密度试验　精密吸取绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素混合对照品溶液注入液相色谱仪,连续进样5次,绿原酸峰面积RSD＝

8、1.12%,黄芩苷峰面积RSD＝0.86%,连翘苷峰面积RSD＝0.72%,汉黄芩素峰面积RSD＝0.58%。结果表明,所选方法精密度良好。　　2.5稳定性试验　精密吸取同一供试品溶液,分别在0、2、4、6、8、10、12、24h进样,测定样品中绿原酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩素的峰面积,结果绿原酸RSD＝1.74%,黄芩苷RSD＝2.04%,连翘苷RSD＝1.81%,汉黄芩素RSD＝2.38%,表明样品溶液在24h内稳定。