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1、改进高效液相色谱法测定双黄连口服液绿原酸含量罗德全(哈药集团制药六厂150056)【摘要】双黄连口服液，主要成分是金银花、黄苓、连翘，木品具有疏风解表、清热解毒的功效，用于外感风热所致的感冒，症见发热、咳嗽、咽痛。中药制剂成分复杂在同一色谱条件下有许多杂质峰干扰主峰检测，使色谱图的主峰面积比实际峰面积大。造成样品浓度虚高的现象。按药典规定的方法，测定绿原酸含量检验周期长，准确度较低。木实验通过改善色谱分离条件，提高高效液相色谱法测定双黄连口服液绿原酸测定准确度。【关键词】双黄连口服液绿原酸HPLC法【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章
2、编号】1672-5085(2013)35-0119-021试剂和仪器试剂：水、甲醇、冰醋酸;仪器：:岛津LC-20A高效液相色谱仪,梅特勒X205电子天平。2方法与结果2.1色谱峰不纯有两个原因及解决措施：(1)样品木身杂质峰未和主峰完全分离，解决措改变柱温，延长保留时间。(2)—针样品的杂质未在分析时间内洗脱下来，而在下一针分析时间内洗脱下来，和待测组分峰包裹在一起，解决措施：提高色谱分析的效率。2.2通过优化色谱分离条件，可提高色谱分离的初始理论塔板数，进而提高色谱分析的准确度，并提高色谱柱使用寿命。可通过改变柱温，更换色谱柱，改变流动相有机
3、相的比例，进样量来达到目的。经过实验过对改变流动相中有机相的比例、更换高校色谱柱、增加样品分析时间、进行梯度洗脱的研究，发现主要是改变柱温、进行梯度洗脱影响较大。2.3经实验得知，柱温这一色谱条件是决定色谱分离的决定因素,X32°C为最佳实验温度。2.4由于绿原酸在18分钟已经从色谱柱中洗脱下来，而最后一个组分则要80分钟才能吸脱下来，根据反相色谱分离原理，可以减小溶剂(流动相)极性来加速组分的洗脱。流动相的极性是将保证绿原酸良好分离和杂质快速洗脫的关键点。2.5在绿原酸出峰以前保持流动相为水■甲醇比例为80：20,在19分钟时调节流动相比例为1
4、00%甲醇。经试验得知在流动相换成100%甲醇8分钟后基线变得平稳，表示不关心的组分已经完全洗脱下来，在27分钟吋将流动相在调冋水■甲醇(80：20)o重新平衡色谱柱，监控检测器SAMP池能量，经过8分种后能量值恢复到初始状态。表明理论上可以进下一个样品继续分析了。这样就将原来的分析时间由80分钟缩短为40分钟了。2.6线性范围试验。取经减压干燥12小时的绿原酸对照品，精密称定，加水溶解转容后，分别制成浓度为7.984、15.968、23.952、31.936、39.92、47.904、55.8888、63.872、71.856、79.84&mu
5、;g/ml的溶液，进样10?1,以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标经冋归，得线性冋归方程Y=3.868713e-008X,线性相关系数γ=0.99999o结果表明:绿原酸在7.984-79.84μg/ml范围内,浓度同峰面积呈良好的线形关系。2.7最小检出量。精密量取线性项下的7.984μg/ml浓度的对照品溶液lml,置于量瓶中，进样10?1,色谱分析显示，信噪比大于3,故最小检出量应为0.27μg/mlo2.8稳定性。取同-•批双黄连口服液按已确定的色谱条件连续进样6次。结果RSD为0.17%,小于2.0%,符合要求
6、。2.9重复性。取绿原酸对照液，按上述色谱条件连续进样6次。样品的实际浓度39.92μg/ml,6次样品的检验平均浓度39.9215μg/ml,检验浓度结果的相对标准差RSD0.002%(<2.0%),符合要求。2.10回收率试验。以已知含量的样品为基液，加入对照品，做加样回收率试验，平均冋收率为99.97%,RSD0.07%(<2.0%),表明方法准确结果可靠。2.11样品稳定性考察。取口服液样品，分别在0、2、4、6、8、10小吋后按上述色谱条件进样分析，RSD0.24%(<2.0%),得出样品溶液在10小吋内相
7、当稳定。3讨论通过改变色谱试验柱温为32°C,使用色谱柱使柱效提高为8000,大大高于要变标准6000,经过1000次试验理论塔板数还维持在7000o通过两种洗脱方式相结合，大大缩短了样品的分析吋间由原来的80分钟缩短为40分钟。经过方法学研究新方法样品浓度在lOug/ml-lOOug/ml范围内浓度与峰面积呈一次过原点线性关系，相关系数0.99999。选同批样品制成六分样品，结果相对标准偏差0.17%<2%(国家标准)。选已知浓度的绿原酸对照液连续进样6次，结果相对标准偏差0.002%。取同批样品按《中国药典附录》做加样冋收试验冋收率为9
8、9.97%。口服液样品，分别在0、2、4、6、8、10小时后按上述色谱条件进样分析，得出样品溶液在10小吋内相当稳定。参考文献[1]刘晶
