三氧化二砷对人成纤维样滑膜细胞生长的影响

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1、三氧化二砷对人成纤维样滑膜细胞生长的影响　　摘要：目的观察三氧化二砷（ATO）对人关节成纤维样滑膜细胞（FLSs）生长的影响，探讨ATO对类风湿关节炎（KA）的潜在治疗作用。方法原代培养人关节FLSs，传至第3-5代时，以不同浓度的ATO处理细胞，通过ELISA对上清液中的TNF-a、IL-1水平进行检测，采用MTT法检测不同处理组细胞生长情况。结果不同浓度的ATO处理后，ELISA结果显示试验各组TNF-d、IL-1检出水平均显著低于对照组（P<0.05），MTT结果显示随药物浓度增加和处理时间延长，抑制作用增强。结论ATO可抑制人FLSs生长，并可发挥抑制滑膜细胞分泌的功效，进而对RA炎性

2、、免疫过程产生干预作用，提示可作为治疗RA的潜在药物。　　关键词：三氧化二砷；成纤维样滑膜细胞；类风湿关节炎　　类风湿关节炎（rheumatoidarthritis，RA）是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫性疾病，其发病机制在目前临床研究中尚未形成统一认知，但既往大量报道中均提示关节滑膜的异常增殖反应在骨组织、软骨组织的侵袭与破坏中有着非常重要的作用，这一机制提示三氧化二砷（arsemictrioxide，ATO）可能通过抑制细胞增殖，加速细胞凋亡的方式发挥对RA疾病的治疗效果。研究。引显示人成纤维样滑膜细胞（6broblast-likesynoviocytes，FLSs）的过度增生

3、和分泌在RA的发病和发展中具有重要作用。本研究通过观察ATO对人FLSs生长的影响，探讨ATO是否对RA具有潜在的治疗作用。　　1.资料与方法　　1.1一般资料采集2015年5月-2015年11月在我院风湿科住院的RA患者的关节积液4例（男1例，女3例，41-67岁，平均年龄55.4岁），体外原代培养人FLSs。三氧化二砷（ATO）（10mg/瓶，购自哈尔滨制药有限公司）；ELISA试剂盒（南京凯基生物科技?l展有限公司）　　1.2方法　　1.2.1人FLSs培养，方法参照文献。4例患者的关节滑液经处理后均成功获得大量成纤维样细胞，经鉴定该细胞为CD68阴性细胞，即FLSs。倒置显微镜观察细胞

4、生长情况，取第3-5代细胞用于实验。　　1.2.2ELISA检测将滑膜细胞按1x10个/孔接种于6孔板中，每个标本的细胞接种4孔，每孔1组，培养24h，按照A-TO终浓度0umol/L、0.5umol/L、2.0umol/L和8.0umol/L加入相应培养孔中继续培养。4孔分别为对照组（0umol/L）、试验1组（0.5umol/L）、试验2组（2.0umo]/L）和试验3组（8.0umol/L）。将反应24h后的上清液取出，并通过ELISA法对上清液中TNF-a、IL-1水平进行检测。　　1.2.3MTT检测将滑膜细胞按5x10个，孔接种于96孔板中，每个标本的细胞接种24孔，6孔1组，培养

5、24h，每组加入相应药物浓度与前述完全一致，另设空白（只加培养液）组6孔。培养1d、2d、3d、4d和5d后，吸去原培养液，每孔加200ul无血清H-DMEM培养液及20ul的MTr（5mg/ml），继续培养4h。小心弃上清，每孔加入150ulDMSO，混匀10min后，在酶标仪上测定各孔490nm处的吸光度A值，最后计算细胞抑制率。　　1.3观察指标对比对照组、试验各组细胞TNF-a、IL-1的检出水平差异，并观察各组ATO对人FLSs的生长状况。　　1.4统计学处理用SPSS19.0统计软件进行数据处理，计量资料表示为（x±s），用t检验；计数资料表示为[n（%）]，用x2检验，P<0.0

6、5时为差异具有统计学意义。　　2.结果　　2.1ELISA结果试验各组TNF-a、IL-1检出水平均显著低于对照组（P<0.05）；试验3组TNF-a、IL-1检出水平显著低于试验2组、1组（P<0.05）；试验2TNF-a、IL-1检出水平显著低于试验1组（P<0.05），见表1。　　2.2MTT结果对照组细胞生长良好，观察第1-2d对照组与试验各组对比无明显差异（P>0.05）；第3d开始，试验各组活细胞数显著低于对照组（P<0.05），且浓度越高，作用剂量依赖性越显著，见图1。　　3.讨论　　RA是目前临床上比较常见的一种自身免疫性疾病，其病因尚未明确。研究表明，FLSs过度增生和分泌是

7、RA发病的重要基础，参与关节的炎症发展和关节破坏。FLSs可表现出转化细胞的特征，呈类肿瘤细胞样异常增殖，侵入到软骨和软骨下的骨质，并产生炎性介质、促炎症细胞因子及抗炎症细胞因子、分泌基质金属蛋白酶等。TNF-a以及IL-1是RA发生、发展过程中重要的炎症因子，抑制FLSs的增殖和活化是目前研究RA的热点，可能为临床上治疗RA提供新的思路或靶点。　　ATO是传统中药砒石的主要成分，对K562、NB