微缺氧对三氧化二砷抑制胃癌细胞sgc7901生长的影响

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1、微缺氧对三氧化二砷抑制胃癌细胞SGC7901生长的影响【关键词】微缺氧；三氧化二砷；人胃癌细胞SGC7901;凋亡InhibitoyEffectofArsenicTrioxideonGastricCancerCellSGC7901DuringHypoxiaKeyol/L；四甲基偶氮唑蓝(MTT)（购于上海华舜生物工程有限公司）。1.2方法1.2.1微缺氧条件的制造运用产气袋法(GasPaK)制造微缺氧条件。通过血气分析仪监测含小牛血清的RPMI1640培养液中PO2、PCO2和pH的变化，本装置在48h内PO2、

2、PCO2和pH稳定，并能达到微缺氧细胞培养的条件（1%～5%氧、5%二氧化碳及90%氮）[4]。1.2.2MTT法检测As2O3对不同氧状态下SGC7901细胞的抑制作用将对数生长期的人胃癌细胞SGC7901制成5×104个/mL的细胞悬液，每孔200μL加入两块96孔培养板内。实验设药物试验组及肿瘤细胞阴性对照组，将三氧化二砷的5个不同浓度分别加在96孔板内，每孔加药量20μL，每个剂量3个平行孔，重复7次。两块96孔培养板分为微缺氧组及常氧组。常氧组在CO2箱内培养(20%氧、5%二氧化碳及75%氮)48h，微

3、缺氧组先入缺氧密封盒并放入37℃隔水式电热恒温烤箱孵育16h，取出后在CO2箱内继续培养32h。两者同时取出离心后吸弃上清，每孔加无血清1640200μL，MTT20μL,CO2箱孵育4h弃上清。每孔加二甲亚砜（DMSO）200μL，用自动酶标读数仪（BioRad550型,美国,波长570nm）测定每孔A值。药物作用效应即抑制率(fa)=（1实验组A值/对照组A值）×100%。根据中效方程式fa/fu=(D/Dm)m（fu为1fa，D为药物浓度，m为斜率，Dm为中效浓度，即0.5效应时的药物浓度），计算Dm值。

4、1.2.3流式细胞仪分析用As2O3常氧下中效浓度的1/3浓度(5.6μmol/L)为处理浓度，取对数生长期的人胃癌细胞SGC7901制成5×104个/mL的细胞悬液，分为对照组、As2O3组、缺氧对照组、缺氧As2O3组各20mL细胞悬液入100mL培养瓶，As2O3组和缺氧As2O3组分别加入5.6μmol/L的As2O32mL处理SGC7901细胞，缺氧对照组、缺氧As2O3组先入缺氧密封盒并放入恒温水浴箱孵育16h，取出在CO2箱内培养56h。对照组、As2O3组在CO2箱内培养。72h后0.1%胰蛋白酶消

5、化收集细胞，PBS洗涤，70%乙醇固定1h，PBS洗涤2次，将等体积的细胞悬液和PI染液混合，4℃放置30min，将样品放入FCM的样品室，以激发波长488nm测定细胞周期，并用ModfitLT2.0软件分析。并重复5次。1.3统计学处理数据用±s表示，分析采用配对t检验或方差分析；数据均用统计软件包SAS8.0分析。2结果2.1常氧和微缺氧状态下As2O3对人胃癌细胞株SGC7901生长抑制作用的变化不同浓度的As2O3在常氧状态下对SGC7901生长均有抑制作用,呈剂量效应关系［γ=0.973，Dm=(19.

6、32±0.52)μmol/L］。在微缺氧状态下，低浓度的As2O3（2μmol/L）对SGC7901生长没有抑制作用，增高浓度后具有抑制作用,并呈剂量效应关系［γ=0.959，Dm=(34.56±0.31)μmol/L］。但同常氧状态下As2O3对人胃癌细胞株SGC7901的抑制率比较,微缺氧状态下,各浓度的As2O3对人胃癌细胞株SGC7901生长的抑制作用均有减弱,抑制率明显下降（P<0.01），见表1。2.2流式细胞仪检测结果在不同氧状态下相同浓度的As2O3作用SGC7901细胞72h后，SGC

7、7901细胞产生明显的亚表1不同氧状态下As2O3对人胃癌细胞株注:P<0.01两组间相同各浓度抑制率比较；★、▲P<0.01同各自细胞对照比较；◆P>0.05两组间细胞对照比较G1期峰，同未经处理的细胞对照组比较G2/M及S期细胞百分比上升，Ｇ0/G1细胞百分比下降，说明细胞滞留于G2/M及S期。常氧下凋亡细胞占9.62%，而微缺氧组凋亡细胞占3.73%，即微缺氧组As2O3作用所诱导的凋亡率明显下降。未经As2O3处理的常氧及微缺氧细胞对照组间流式细胞仪分析结果无差异，见表2。表2不同氧状态下A

8、s2O3对SGC7901细胞周期　　3讨论近年来，多项研究发现低浓度As2O3能通过诱导肿瘤细胞凋亡，达到抑制肿瘤细胞生长的作用。有学者认为As2O3可能通过干扰巯基酶类的活性[5]，调控癌相关基因表达[6]以及通过阻抑癌细胞周期进程[7]等途径来抑制癌细胞增殖，诱导癌细胞分化及凋亡。本实验资料显示，As2O3在不同氧状态下均能