tnf_il_1_通过pka通路诱导成纤维样滑膜细胞中力生长因子表达

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1、医用生物力学第卷第期年月文章编号：、通过通路诱导成纤维样滑膜细胞中力生长因子表达黄杨河，罗自维，李海滨，吴双迟，吕永钢，刘万钱，钟莉，杨力“”基地重庆大学生物工程学院，生物流变科学与技术教育部重点实验室，国家计划，重庆摘要、、对：目的探讨炎症因子力生长因子（表达的影响。方法实验组细胞用浓度为、、的、或者是、、的处理抑制剂组在因子处理前用预处理然后添加炎症因子刺激对照组细胞保持与实验组培养条件一致的情，况下不添加因子刺激。因子刺激后，用定量方法检测细胞中表达量。结果和因子刺激滑膜成纤维细胞诱导表达显著增加（。对表达无影响。通路抑制剂处理显著

2、降低和诱导的表达（。结论炎症因子和在浓度分别为和时能显著诱导滑膜成纤维细胞中表达其表达是通过通路一定的现实意义介导的。本研究对于促进用于改善膝关节相关组织修复中的应力刺激不足有。关键词：力生长因子；成纤维样滑膜细胞；应力刺激中图分类号：：文献标志码，：，，，，：；；收稿日期修回日期基金项“”世纪优秀人才支目学校学科创新引智计划家）国家学基金资助项：高等（国计划（自然科目（，新持计划（重庆大学大型仪器设备开放基金。通信作者杨力，教授，吕永钢，教授，。黄杨河等通过通路诱导成纤维样滑膜细胞中力生长因子表达在骨骼肌和肝脏中主要表达的胰岛素样生长因

3、（天津生物有限公司）；青霉素和链霉素（华北子的全长基因制药公司）；姨蛋白酸（公司，美国）；⑴含个外显子转录翻译生成。但当其受公司，美国）；提取试剂盒（百泰克，到刺激时可在外显子到间产生两种不同剪接变中国）；反转录试剂盒（公司，美国）体形式，或啮齿动物中称为恒温培养箱（，美国）；、、后者端包含有外显子、以及二者间公司，美国）；插入的长度为的外显子的部分序列（啮齿美国）。动物中为。与相比该剪接形式产细胞培养生了开放阅读框的改变一。这种剪接变体在啮齿动物滑膜组织来源于重庆医科大学附属第医院及中称为在人当中称为，并且在肝西南医院因外伤行下肢截肢治

4、疗患者的正常膝关脏和肌肉中都能检测到这种形式的变体。节。组织获取经医院伦理委员会批准，患者签署知在响应肌肉损伤和机械刺激时显著增加，这引起了情同意书。的获取方法参考文献。在无肌肉领域专家的兴趣，在肌肉经历高强度菌条件下，取出截肢病患正常的滑膜组织（拉伸运动后，骨骼肌中的水平上升了用含双抗的多次冲洗，冲洗倍，故也称为力生长因子（后在含双抗的中以解剖剪剔除组织多余。的脂肪和结缔组织，然后用眼科剪将滑膜组织剪成目前尚不清楚诱导合成的机制。机械载大小的组织块，随后将滑膜组⋯荷和骨骼肌匀浆液均能诱导成肌细胞织块以适当的间距放入培养瓶中，并加人含的表

5、达。机械拉伸也能刺激肌腱细胞中的合叩％胎牛血清（、⑴成。的经典诱导激素生长激素激活成肌细谷氨酸、青霉素、链霉素的胞系中的合成。培养液的过热和酸高糖培养液。静置于的孵箱化等细胞应激因子也能刺激初级成肌细胞和分化的中培养每更换次培养液。待组织块周围长满多核肌管细胞表达。然而胞内激活表细胞，将组织块以相同方法移人新的培养瓶中继续达的信号转导通路鲜有报道。等报培养的细胞让其继续生长，原培养瓶中，当原代培养道了胞内第信使在大鼠和人的成肌细胞和的细胞长至融合时，以的胰蛋白酶消化肌管细胞中诱导的合成，的诱导作用与进行原代培养。取代稳定的传代细胞用于实蛋

6、白激酶通路相关但与蛋白无关。验。多余细胞用冻存置于液氮中保存备用。较早前有文献报道和提高了人成纤维细因子处理胞中水平。在组织损伤后，组织内、将生长于培养瓶中的细胞用胰、的表达水平显著增高。本研究认为，组蛋白酶消化，以的密度接种于孔板织损伤后的炎症响应能激活的表达，而且可能中，置于培养箱内培养。待细胞贴壁生长是通过通路实现的，本研究采用炎症因至融合后换成体积分数为；因此的子、、刺激正常的人成纤维样滑膜培养液继续培养使各组细胞状态达到同步。细胞（，并采用然后在体积分数为的培养液中分别加入通路的抑制剂预处理细胞然后用炎、，、、、、症因子刺激细胞

7、，用实时定量方法检测处理细胞，后用提取试剂盒裂水平，以探讨炎症因子与表达的关系。解液裂解细胞并提取。或者用通路抑制剂预处理，然后加人因子刺激材料和方法⑵，提取细胞总醒。主要试剂和仪器细胞总提取反转录及荧光定量分析，公司，美国）；优质胎牛血清使用百泰克公司高纯总快速提取试剂盒医用生物力学第卷第期年月离心柱型）进行提取，提取步骤根据试剂盒因子处理对中表达无影响说明书进行。不同实验条件下的细胞总按照分别用、、的因子处理微量分光光度计测定的统一量，使用，以无因子处理组作为对照组于后提取，公司细胞并反转录，定量法检测表达，在下反转录。反转录结束后，

8、实验结果如图所示。以相应量的为模板进行和基因“的定量反应。每个反应进行个技术重复。不同实验条件实验重复次以上。和基因的引物序列由英潍捷基（上海）贸易有限公司■■合成引物序列见表。每个反应加人卜