人胎盘组织造血干-祖细胞的分离富集

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1、人胎盘组织造血干/祖细胞的分离富集作者：章涛，陈代雄，方宁，刘祖林，祁莹，刘金伟【摘要】为了探索从胎盘组织中分离富集造血干/祖细胞（HSPC）的标化流程，采用机械法加胶原酶消化法制备人胎盘组织单个细胞悬液，用羟乙基淀粉（6%HES）法从中分离出单个核细胞（MNC），再经免疫磁珠分选法分选出CD34-、CD34+CD38-、CD34+CD38+3个细胞亚群，用流式细胞术对各阶段分选细胞进行表型分析并计算分选细胞的富集度和回收率。结果表明：机械法加胶原酶消化法制备的人胎盘组织单个细胞悬液中单个核细胞（MNC）数达（12.30±3.51）×108，与脐血初始样品所含的MNC数

2、（8.86±5.38）×108比较差异无统计学意义，而其CD34＋细胞所占百分率［（3.93±2.31）%］则明显高于脐血［（0.44±0.29）％］。胎盘组织单个细胞悬液经6%HES分离后MNC和CD34＋细胞的回收率分别为（45.3±11.7）％和（51.1±9.8）%；MNC经免疫磁珠分选后，其CD34＋细胞的纯度和回收率分别为（73.4±14.1）％和（52.7±11.7）%。结论：本实验所建立的"机械法加胶原酶消化法-HES分离MNC-MACS分选目标细胞"的分离纯化方法可从胎盘组织获得高丰度、高富集度、高活性的HSPC，为进一步研究胎盘HSPC提供了比较经济

3、、效果较好的分离富集方案。【关键词】CD34抗原；造血干细胞；胎盘；免疫磁珠细胞分选；脐血　　IsolationandEnrichmentofHematopoieticStem/ProgenitorCellsfromHumanPlacentaTissue　　AbstractTheaimofthisstudyatopoieticstem/progenitorcells(HSPC)fromhumanplacentatissue(PT).Single-cellsuspensionfromofhumanPTechanicalmethodbinedPTmunophenotypes

4、(CD34-,CD34+CD38-,CD34+CD38+)containedinMNCmunophenotypeofeachsortingstepseter(FCM).Thecellenrichmentandrecoveryrateofeachsortingstepasingle-cellsuspensionofhumanPTbymechanicalmethodandcollagenasedigestion,nosignificantdifferenceexistedasparedbilicalcordblood(UCB)initialsample［(8.86±5.38

5、)×108］,butthepercentageofCD34+cellsinMNCofhumanPTuchhigherthanthatinUCB［(0.44±0.29)%］(P<0001).recoveryrateofMNCandCD34+cellsfromPTafterseparationentandrecoveryrateofCD34+cellsinCD34+groupatopoieticstem/progenitorcellsfromhumanplacentacanacquireHSPCentandviabilityandmaybeausefulrefere

6、nceofisolatingmethodsforfuturerelatedstudy.　　Keyatopoieticstemcell;placenta;MACS;umbilicalcordblood　　造血干/祖细胞（hematopoieticstem/progenitorcells，HSPC）存在于人骨髓、动员的外周血和脐血等组织中［1-3］。新近，有学者提出人胎盘组织中含有比脐血更为丰富的造血干细胞［4］；人胎盘组织中CD34+HSPC的百分率是脐血的8.8倍，并且人胎盘组织中免疫细胞成分较少，极有希望成为今后HSPC的新来源［5］。从人胎盘组织分离出高活性、高丰度

7、的HSPC是对其进行相关生物学特性等研究的前提，目前尚无有关人胎盘组织HSPC分离的优化方案可循。本研究旨在建立从胎盘组织中分离、纯化HSPC的标化流程，为今后人胎盘组织HSPC的深入研究打下良好的基础。　　材料和方法　　主要试剂　　胶原酶（collagenaseⅣ）、羟乙基淀粉（hydroxyethylstarch，HES）为Sigma公司产品。RPMI1640、新生牛血清（FCS）购自于Gibco公司。荧光标记单克隆抗体CD38-FITC、CD34-PE及CD34绝对计数试剂盒为BectonDickinson公司产品。免疫磁珠细胞分选