一种易操作的小鼠肝细胞的分离及培养方法

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1、一种易操作的小鼠肝细胞的分离及培养方法鵬臟臟。永玲郑江第三军医大学第一附属医院中心实验室摘要：目的在传统肝细胞提取方法的棊础上，优化一种易操作、快速实用获取小鼠肝细胞的方法，为从事肝脏功能相关研宂人员提供改良的实验方法参考。方法以肝脏分离液逆向灌注小鼠肝脏后，剪碎，肝脏酶消化后密度梯度离心分离肝细胞，转入培养基培养。采用台盼蓝染色计算细胞活力，流式细胞检测技术计算纯度，倒置显微镜观察细胞形态。结果获得较高纯度和活力的肝细胞，具备肝细胞的典型形态特征。结论通过逆向灌注，降低/灌注的难度，同时获得较高纯度、较高活力的肝细胞，经多次实验证明该方法确实是一种易操作、高效适用的肝细胞提

2、取方法。关键词：C57BL/6J小鼠;肝细胞;逆向灌注;活力;纯度;作者简介：范仕郡（1983-）,男，助理研究员，研究方向:脓毒症的发病机制与拮抗措施研宄。E-mail:574472439@qq.com作者简介：郑江（1961-）,男，研究员，研究方向:脓毒症的发病机制与拮抗措施研究。E-mail:zhengedu.cn收稿日期：2017-03-20基金：国家自然科学基金项FI（编号:81372089）一种易操作的小鼠肝细胞的分离及培养方法鵬臟臟。永玲郑江第三军医大学第一附属医院中心实验室摘要：目的在传统肝细胞提取方法的棊础上，优化一种易操作、快速实用获取小鼠肝细胞的方法，

3、为从事肝脏功能相关研宂人员提供改良的实验方法参考。方法以肝脏分离液逆向灌注小鼠肝脏后，剪碎，肝脏酶消化后密度梯度离心分离肝细胞，转入培养基培养。采用台盼蓝染色计算细胞活力，流式细胞检测技术计算纯度，倒置显微镜观察细胞形态。结果获得较高纯度和活力的肝细胞，具备肝细胞的典型形态特征。结论通过逆向灌注，降低/灌注的难度，同时获得较高纯度、较高活力的肝细胞，经多次实验证明该方法确实是一种易操作、高效适用的肝细胞提取方法。关键词：C57BL/6J小鼠;肝细胞;逆向灌注;活力;纯度;作者简介：范仕郡（1983-）,男，助理研究员，研究方向:脓毒症的发病机制与拮抗措施研宄。E-mail:5

4、74472439@qq.com作者简介：郑江（1961-）,男，研究员，研究方向:脓毒症的发病机制与拮抗措施研究。E-mail:zhengedu.cn收稿日期：2017-03-20基金：国家自然科学基金项FI（编号:81372089）AsimplifiedmethodforisolationandcultureofprimarymousehepatocytesFANShi-junLIUXinYANGDongZHUYuan-fengLUYong-lingZHENGJiangMedicalResearchCenter,FirstAffiliatedHospital，ThirdMi

5、litaryMedicalUniversity;Abstract：ObjectiveTosimplifyandoptimizethemethodforisolationandcultureofprimarymousehepatocytesonthebasisofconventionalextractionmethod,andtoprovideareferenceforrelatedresearch.MethodsMouseliverwasreverselyperfusedwiththeisolationsolution(i.e.,throughthevenacavainfer

6、iorin,andportalveinout)，cutintosmallpiecesanddigestedwithenzymes.Thenthehepatocyteswereisolatedbydensitygradientcentrifugationandtransferredintoculturemedium.Thecellviabilitywasdetectedbytrypanbluestaining.Thepurityofthehepatocyteswasanalyzedbyflowcytometryandthecellmorphologywasobservedwit

7、haninvertedmicroscope.ResultsThehepatocytesobtainedbythisimprovedmethodshowedhighviabilityandpurity,withtypicalcharacteristicsofcellmorphology.ConclusionsTheliverperfusionisfacilitatedbyreversedperfusion,andtheisolatedhepatocytesarewithhighviabilityandpu