一种易操作的小鼠肝细胞的分离及培养方法.doc

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1、一种易操作的小鼠肝细胞的分离及培养方法范仕郡刘鑫杨东祝元锋鲁永玲郑江第三军医大学第一附属医院中心实验室摘要：冃的在传统肝细胞提取方法的基础上，优化一种易操作、快速实用获取小鼠肝细胞的方法，为从事肝脏功能相关研究人员提供改良的实验方法参考。方法以肝脏分离液逆向灌注小鼠肝脏后，剪碎，肝脏酶消化后密度梯度离心分离肝细胞，转入培养基培养。采用台盼蓝染色计算细胞活力，流式细胞检测技术计算纯度，倒置显微镜观察细胞形态。结果获得较高纯度和活力的肝细胞，具备肝细胞的典型形态特征。结论通过逆向灌注，降低了灌注的难度，同时获得较

2、高纯度、较高活力的肝细胞，经多次实验证明该方法确实是一种易操作、高效适用的肝细胞提取方法。关键词：C57BL/6J小鼠;肝细胞;逆向灌注;活力;纯度;作者简介：范仕郡（1983-），男，助理研究员，研究方向:脓毒症的发病机制与拮抗措施研究。E-mail:574472439@qq.com作者简介：郑江（1961-）,男，研究员，研究方向:脓毒症的发病机制与扌吉抗措施研究。E-mai1:zhengedu.cn收稿日期：2017-03-20基金：国家自然科学基金项目（编号:81372089）一种易操作的小鼠肝细胞的

3、分离及培养方法范仕郡刘鑫杨东祝元锋鲁永玲郑江第三军医大学第一附属医院中心实验室摘要：冃的在传统肝细胞提取方法的基础上，优化一种易操作、快速实用获取小鼠肝细胞的方法，为从事肝脏功能相关研究人员提供改良的实验方法参考。方法以肝脏分离液逆向灌注小鼠肝脏后，剪碎，肝脏酶消化后密度梯度离心分离肝细胞，转入培养基培养。采用台盼蓝染色计算细胞活力，流式细胞检测技术计算纯度，倒置显微镜观察细胞形态。结果获得较高纯度和活力的肝细胞，具备肝细胞的典型形态特征。结论通过逆向灌注，降低了灌注的难度，同时获得较高纯度、较高活力的肝细胞

4、，经多次实验证明该方法确实是一种易操作、高效适用的肝细胞提取方法。关键词：C57BL/6J小鼠;肝细胞;逆向灌注;活力;纯度;作者简介：范仕郡（1983-），男，助理研究员，研究方向:脓毒症的发病机制与拮抗措施研究。E-mail:574472439@qq.com作者简介：郑江（1961-）,男，研究员，研究方向:脓毒症的发病机制与扌吉抗措施研究。E-mai1:zhengedu.cn收稿日期：2017-03-20基金：国家自然科学基金项目（编号:81372089）Asimplifiedmethodforisol

5、ationandcultureofprimarymousehepatocytesFANShi-junLIUXinYANGDongZHUYuan-fengLUYong-lingZHENGJiangMedicalResearchCenter,FirstAffiliatedHospital,ThirdM订itaryMedicalUniversity;Abstract：ObjectiveTosimplifyandoptimizethemethodforisolationandcultUTeofprimarymouse

6、hepatocytesonthebasisofconventionalextractionmethod,andtoprovideareferenceforrelatedresearch.MethodsMouseliverwasreverselyperfusedwiththeisolationsolution(i.e.,throughthevena・cavainferiorin,andportalveinout),cutintosmal1piecesanddigestedwithenzymes.Thentheh

7、epatocyteswereisolatedbydensitygradientcentrifugationandtransferredintoculturemedium.Thecellviabilitywasdetectedbytrypanbluestaining.Thepurityofthehepatocyteswasanalyzedbyflowcytometryandthecellmorphologywasobservedwithaninvertedmicroscope.ResultsThehepatoc

8、ytesobtainedbythisimprovedmethodshowedhighviabilityandpurity,withtypicalcharacteristicsofcellmorphology.ConclusionsTheliverperfusionisfacilitatedbyreversedperfusion,andtheisolatedhepatocytesarewithhigh