小鼠肝细胞的体外培养（毕业论文）.doc

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1、本科毕业论文4、鼠肝细胞的体夕卜培养学院：生命科学学院专业：生物科学姓名：学号：071115818指导教师：职称：讲师论文完成日期：二O—一年六月摘要许多学者成功地应用肝细胞移植或肝细胞为基础的生物人工肝治疗了严重的肝衰竭及晚期代谢性肝病患者，为给临床进行肝细胞移植和生物人工肝治疗提供实验依据,建立一种操作简单且成本较低的小鼠肝细胞的简易分离方法，以用于原代肝细胞的分离培养的研究，本实验通过酶解法与组织块培养法分离并培养小鼠肝细胞，得到生长状态良好的原代肝细胞并进行传代培养，并进一步为生物型人工肝细胞研究奠定实验基础。【关键词】小鼠肝细胞细胞培养AbstractSomes

2、cholarshavesuccessfullyappliedhepatocytetransplantationorlivercellbasedbioartificiallivertreatsevereliverfailureandliverillpatient,lateformetabolichepatocytetransplantationandclinicalforbioartificiallivertreatmentswithexperimentalbasis,establishasimpleoperationandlowcostoflivercellsinmice

3、withsimpleseparationmethodsfortheoriginalgeneration,theseparationofthelivercells,andfurthertrainingforbiologicaltypeartificiallivercellresearchfoundationlaidexperimento[Keywords]mice;Livercell;cellculturetechnology;1引言11.1组织细胞培养的发展11.2现代细胞培养11.3细胞培养的定义21.4细胞培养的意义21.5细胞体外培养的优点31.6细胞培养的影响因素

4、31.7获得肝细胞的方法41.7.1机械分离法41.7.2胰酶消化法41.7.3胶原酶消化法41・7・4离体胶原酶灌流法42材料与方法52.1实验材料52・2实验方法52.2.1肝细胞的获得52.2.2酶消化法52.2.3组织块培养法52.2.4传代培养53结果与分析73.1组织块培养图片73.2酶消化法培养图片74讨论8参考文献91引言1.1组织细胞培养的发展1907年，Hmrison选用蛙组织之源，可能是因为它属于冷血动物，这样便无需温育；比较低等的动物组织颇为常见；随后由于医学科学的刺激使得以后的兴趣转向了对温血动物的研究。因为他们的止常发育或是病理都与人体密切相关

5、。在培养屮许多鸡胚组织都能良好生长，因此，可利用性使得鸡胚成为人们喜欢选择的材料，但是，随着实验性畜牧业，尤其的啮齿类遗传性纯种的发展，乂使得哺乳动物成为更受青睐的材料。虽然鸡胚组织还可以提供原代培养的各种类型的细胞，但啮齿动物的组织具有形成连续细胞系的优点，而且可产生各利咯样的可移植性的肿瘤。转基因小鼠技术的建立以及对小鼠遗传背景的深切认识更让人们乐于选择它作为实验动物。虽然许多学者以前研究过动物细胞的体外行为，动物细胞首次应用于生产是在1949年，实验证明体外培养的灵长H动物神经和菲神经组织的细胞能够感染和繁殖骨髓灰质炎病毒。其次，在此之前动物细胞培养的探索已长达半个

6、多世纪。最早的当数Arnold于1880年证明白细胞能在体外分裂，1885年徳国人Roux用生理盐水保持鸡胚细胞存活了数刀。1897年Loeb证明从血液和结缔组织屮分离的细胞在血清和血浆屮可存活。1903年Jolly用盖片悬滴法培养蝶嫄白细胞，细胞进行分裂并存活近一个刀o1.2现代细胞培养现代细胞培养应该说是从Harrison和Carrel两人开始的。Harrison于1907年在无菌条件下，采用悬滴法在淋巴液屮培养蛙胚神经纽织生存了数周，观察到神经细胞突起生长的过程，创立了体外观察和研究活纽织的方法。1913年，Carrel采用严格的无菌技术致使细胞长期培养，据报道最长

7、达34年之久，其创造性的工作揭示离体的动物细胞在适当的培养条件下具有近于无限的生长和繁殖能力。1923年他乂引入了一种Carrel培养瓶，可以方便地进行无菌穿戴培养，此瓶成为细胞培养瓶的鼻祖。在细胞培养方面的乂一明显进步是在1916年Roux和Jones采用胰蛋白酶消化纽织基质，形成游离的细胞，此后乂用于贴壁依赖性的细胞传代培养。但该技术直到20世纪50年代才趋于成熟。20世纪40年代，青霉素、链霉素等抗生素相继被发现并被引入细胞培养过程，有助于常规的保持培养基无菌和减少污染，使得细胞培养成为一种广泛应用的实验室技术。细胞培养