去透明带小鼠早期胚胎的体外培养

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1、Y877488分类号：Q!§互S——uDc：量Z曼密缓：尘牙学校代码：10712研究生学号：S03289西北农林前提大学2006届攻读硕士学位研究生学位(毕业)论文去透明带小鼠早期胚胎的体外培养学科专业：研究方向：研究生：指导教师：完成时间：筮直．生．堑堂堕塾麴塑厘膪互捏出丞韭监．夔援窒鱼鱼鱼生鱼且中国陕西杨凌口舌9去透明带小鼠早期胚胎的体外培养摘要本研究以昆白小鼠为实验对象，对早期胚胎体外培养液进行筛选和培养条件的优化。在此基础上，通过比较WOW法和琼脂包埋法对无透明带胚胎培养的影响，从中选择更有利于去透明带胚胎培养的

2、方法。目的是建立一种在本实验室环境下利于去透明带小鼠早期胚胎体外培养的方式，为最终降低小鼠核移植操作难度并提高其效率完成基础性的工作。实验主要结果如下：1．用4种组成成分不同的常用培养液对小鼠早期胚胎进行体外培养，观察到4种培养液中从2一细胞发育到4一细胞的胚胎率为30．5％～43．5％，差异不显著。KSOM组囊胚率为40．996，显著高于其它各组(27．996～30．096)。2．分别采用KSOM和KSo~k两种培养液，对小鼠早期胚胎与输卵管上皮细胞(MOEC)或卵丘细胞(cc)进行共培养，观察从2一细胞发育到4一细胞

3、的胚胎数和囊胚数的变化。结果显示：共培养对克服小鼠2．细胞发育阻滞作用明显，输卵管上皮细胞共培养效果好于卵丘细胞。添加胎牛血清组效果明显好于不添加组效果。3．用WOW(Thewellofthewell)培养法和琼脂包埋培养法对去透明带小鼠原核胚进行培养，统计去透明带原核胚的囊胚发育率、囊胚回收率和囊胚细胞数。用WOW法培养去透明带小鼠原核胚，其囊胚发育率(29．6％)与琼脂包埋培养法(34．7％)相比差异不显著，但前者的囊胚回收率(80．3％)和囊胚细胞数06)显著低于后者(90．5％，46)。结果表明：琼脂包埋培养是去

4、透明带小鼠早期胚胎体外培养的较好方法。4．采用琼脂包埋无透明带原核胚，直接培养(非共培养)或与输卵管上皮细胞共培养。非共培养的2一细胞胚胎比率(86．4％)与琼脂包埋培养的2～细胞胚胎比率(88．7％)相比差异不显著；但是突破2一细胞发育阻滞的胚胎率，共培养组(46．9％)高于非共培养组07．2％)，差异显著；囊胚的发育率，共培养组(443％)显著高于非共培养组(34．7％)。结果表明：琼脂包埋培养法结合共培养可以提高去透明带小鼠早期胚胎体外培养的发育率。关键词：小鼠；体外共培养；无透明带；早期胚胎MOUSEZONA．F

5、REEEMBRYOCULTRUEINVIVoABSTRACTBasedonKun-mingstrainmOllSe，thisstudyfirstlyscreenedamoresuitableculturemediumfromfourculturemediumsandperfectedtheinvivoculturewayofzona．f}eeembryos．Thenthroughcomparingtheinfluenceofthewellofthewell(WOW)methodandagaroseembedculture

6、method∞zona-freeembryos'developmentinvivo。weselectamoresuitableculturemethod。111epBrpOseofthestudyistosetupan加vivoculturesystemforzona-frceembryoswhichfitstotheenvironmentofOurlaboratoryandcompletethebasicworkwhichultimatelyreducestechniquesdifficultiesandincreas

7、esthenucleartransferefficiency．n圮mainresultsWel'@followed：1．Fourdifferentcommonmediumswefeusedtoculturemollsepreimplantationembryosinvitro．Theresultshowedthatembryodevelopmentratefrom2-cellto4—ccllrangedfrom30．5％～43．5％andthedifferencewasnotremarkable．Theblastocys

8、tsrateinKSOMgroupwas40．996，higherthanothergroups(27．996～30．O％)．2．TbtakeKSOMandKSOMFBsasculturemedium,theembryosseparatelyco-culturewithmOUseoviductepithelialce