体外培养小鼠肾脏的形态计量学研究

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1、体外培养小鼠肾脏的形态计量学研究【摘要】目的观察胚龄12、14、16、以及生后1天的肾组织体外培养的发育情况，与同期在体发育进行比较，探讨肾组织体外培养的胚龄选择。方法应用光镜连续切片技术结合体视学方法定量检测培养前、后肾组织以及各期肾小体的体积。结果胚龄12天（E12）体外培养发育情况与在体无显著差异，其余各组随胚(日)龄的增加,小鼠肾组织的体外发育呈下降趋势。结论小鼠肾组织体外培养，胚(日)龄越小其生长发育越接近在体情况，以孕12天之前较适宜。【关键词】组织培养；小鼠；肾脏发育；形态计量学研究Abstract

2、:ObjectiveToobservethedevelopmentofmousekidneyinvitroatembryonicday12、14、16andpostnatalday1,andcomparewiththedevelopmentofhomeochronouskidneyinvivo.Andtoselecteligibletheembryonicageforkidneycultureinvitro.MethodLightmicroscopecombinedwithstereologicalmethods

3、wereusedtoobserveandanalyzerenaltissueandcorpusclesatdifferentdevelopmentalstagesinvivoandvitro.ResultThereisnodifferenceinthedevelopmentkidneybetweeninvitroandinvivoatembryonic12days.Thedevelopingspeedoftherestrenaltissuetendtodecreasewithage.ConclusionInorg

4、ancultureofthemetanephridiumtheyoungertheageof10mouse,thecloserthedevelopmentandgrowthcomparedwiththoseinvivo,itiseligiblebeforetheembryonicday12.Keywords:organculture；mouse；kidneydevelopment；MorphometricAnalysis肾组织体外培养是借助体外培养技术，将肾脏切成薄片进行培养、研究的技术［1］。国外学者对肾组织体

5、外培养进行了大量研究［2］,但有关不同胚(日)龄小鼠肾组织体外培养的发育情况,及其与在体发育同步性比较的系统研究尚未见报道。国内学者对肾组织体外培养研究则更少。本文应用光镜连续切片技术结合体视学定量分析方法，对体外培养不同胚（日）龄小鼠肾组织的发育情况进行系统观察分析,确定肾组织体外培养的适宜胚龄,为在胚胎肾脏发育中各种影响因素的研究提供基本实验依据。1材料与方法　　1.1材料25～30g的成年健康雌、雄性昆明系小白鼠30只，由辽宁医学院实验动物中心提供；含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基，谷氨酰胺，由北京

6、华美公司提供。1.2动物培养10昆明系小白鼠雌、雄(1∶1)同窝饲养。早8:00晚5:00观察阴道栓，见阴道栓出现计为胚龄(embryonicdays，E)0d［3］，记录受孕时间，孕鼠分笼饲养2周后,早8:00晚5:00观察生产情况，以观察到仔鼠出生的最早时间记为生后0d。选取胚龄12、14、16、18天的胎鼠和生后1、3、5、7天的仔鼠各10只（分别来自5只孕鼠或母鼠）进行体内对照研究；胚龄12、14、16天的胎鼠及生后1天的仔鼠各20只（分别来自5只孕鼠或母鼠）进行体外培养研究。1.3实验方法〖*2〗1.3

7、.1标本制备各组孕鼠经10%水合氯醛麻醉（仔鼠无需麻醉）后，迅速放入75%酒精消毒，无菌条件下快速取出胎鼠或仔鼠肾脏。部分入4%多聚甲醛固定，常规脱水透明，石蜡定向包埋，用于体内对照。其余用于体外培养，孕12天胎鼠全肾培养，其余用排刀切成250～350μm厚的薄片，在室温下仔细分离成单片，6孔培养板内每孔放入1mlDMEM/F12培养基，并放置微孔滤膜（孔径0.4μm），用吸管将完好的后肾组织片转移至滤膜上，每个滤膜上放5片，移去滤膜表面多余的培养液，入CO2孵箱(37℃，5％CO2)培养，每2日换液1次［4］。

8、分别取培养2、4、6天后的肾组织入4%多聚甲醛固定，常规脱水透明，石蜡定向包埋。体内、体外肾组织包埋后，全部做5μm厚的连续切片，等间隔选取肾组织切片，HE染色，光镜下观察并测量。101.3.2体视学测量光镜下应用目镜方格测试系统、点计数法［5］，根据公式vv=px/pc分别测算出逗号小体、S小体、Ⅲ、Ⅳ期肾小体的体积密度,px为方格系统落在所测结构的点数，pc为方格系统