小鼠pgcs的分离鉴定及体外培养初步研究

《小鼠pgcs的分离鉴定及体外培养初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、ｒ．ｒ学校代码：１０１２６学号：３１２０８０４５＇Ｉ分类号：编号：Ｖ－．．．．．厂。：，“：＾Ａ＾纖：ＩＮＮＥＲＭＯＮＧＯＬＩＡＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ－‘１．ｉ．爾±學傲逾龛ＭＡＳＴＥＲＢｌｉｉＥｌＲＴＡＴＩＯＭ‘？■＇＂－－＞、？，．ｎｒ：－Ｖｉ．；：？．；‘？？－：‘、‘？－－ｘ－＜？．＼？．小鼠ＰＧＣｓ的分离鉴定及体外培养初步研究ＩＳＯＬＡＴＩＯＮＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＡＮＤＩＮＶＩＴＲＯＣＵＬＴＵＲＥＯ

2、Ｆ，ＭＯＵＳＥＰＲＩＭＯＲＤＩＡＬＧＥＲＭＣＥＬＬＳ生侖科學学院￥学院：专业：—动物学研究方向：生殖屯物学及生物技术？；．姓名：魏玲海指导教师：于海泉研究员－－－、：＾：ｒ‘－？ａ■？？？‘＊－＂－？？．ｅＪｉ？？＜？．．‘．广‘－、．ｚ．／，．．－■－－，Ｊ．，ｒ＾■；二＇．Ｍ－‘？■廉；－．：；Ｖ：：：，．？．‘■？－；：学校代码：１０１２６学号：３１２０８０４５分类号：编号：

3、小鼠ＰＧＣｓ的分离鉴定及体外培养初步研究ＩＳＯＬＡＴＩＯＮＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＡＮＤＩＮ，ＶＩＴＲＯＣＵＬＴＵＲＥＯＦＭＯＵＳＥＰＲＩＭＯＲＤＩＡＬＧＥＲＭＣＥＬＬＳ学院：生命科学学院专业：动物学研究方向：生殖生物学与生物技术姓名：魏玲海指导教师：于海泉研宄员２０１５年５月２８日原创性声明丨本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究：：作及取得的研究成果》除本文，己经注明引用的内容外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果也不包禽为获得

4、内蒙古大－－。与我同室及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料：１：作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。＾学位论文作者签名：ｉｔｓ珍涛指导教师針厚２２０丨，６．１：５曰期：ＩＩ期在学期间研宄成果使用承诺书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙古大学每权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘，允许编入有关数据库进行检索、，也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权，作

5、者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研穴内容或研究成果，须Ｕ丨征得内蒙古大学就读期间导师的同意：若用千发表论文，版权单位必须署名为内蒙Ａ人学方投稿或公开发表。学位论文作者签名：：指导教师签名Ｔ＾２抓－（、日期曰期：＞：内蒙古大学硕士学位论文小鼠ＰＧＣｓ的分离鉴定及体外培养初步研究摘要原始生殖细胞（Ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌｅｒｍｃｅｌｌｓ，ＰＧＣｓ）是哺乳动物生殖细胞的前体ｇ细胞，是在胚胎发育早期具有多能性和独特迁移活性的细胞，近年来己成为研宄细胞命运决定、

6、细胞迁移和表观遗传重编程调节机制的重要模型。但由于ＰＧＣｓ细胞数量有限、分离纯化难度大，这也使得相关研究还有待深化。本研宄对小鼠ＰＧＣｓ细胞进行了初步的分离、鉴定和体外培养。本研究选取１０．５ｄｐｃ和１３．５ｄｐｃ的小鼠胎儿，分别利用机械法和酶消化法获－得分散的混合细胞，对细胞进行特异性ＳＳＥＡ１抗体标记后，使用流式细胞仪分选ＰＧＣｓ，并对分选获得的细胞进行了碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＫＰ）－染色和多能性标记分子０ＣＴ４免疫荧光染色鉴定，最后通过ＲＴＰＣＲ技术检测了ＰＧＣｓ特异性基因

7、的表达。结果显示，分选所得细胞碱性磷酸酶阳性率为８６－－．８０％ＳＳＥＡ１ＰＣＲ技，免疫荧光染色表明所分选细胞呈和０ＣＴ４为阳性。ＲＴ术检测结果显示分选细胞表达Ｐｎ／ｗｈＬｈｃｇｒ、ＤｐｐａＳ．等ＰＧＣｓ特异性标记基因，表明流式细胞分选获得的细胞主要为ＰＧＣｓ。为建立ＰＧＣｓ细胞的培养方法，本研究采用胚胎生殖细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｅｒｍｇｃｅｌｌｓ，ＥＧ）培养液对经机械法和酶消化法获得的细胞进行初步培养并比较了不同饲养层（ＭＥＦ和ＳＴＯ）和基底膜基质（ＢａｓｅｍｅｎｔＭｅｍｂｒａｎｅＭａｔｒｉｘ）的培养

8、１小鼠ＰＧＣｓ的分离盛定及体外培养初步研宄效果。结果表明，在以上三种培养体系中，１３．５ｄｐｃ胚胎来源的ＰＧＣｓ通过体外培养，均未形成集落。１０．５ｄｃ胚胎来源的