大鼠创伤性脑损伤zo-1动态变化研究

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1、大鼠创伤性脑损伤ZO-1动态变化研究【摘要】目的探讨紧密连接蛋白ZO-1在创伤性脑损伤中的变化及意义。方法大鼠随机分为对照组和脑损伤组(0.5h、1h、3h、6h、24h)，参照Feeney’s的自由落体致伤法，制作大鼠顶叶局灶皮质挫裂伤模型。应用伊文氏兰(EvansBlue)法测定伤后不同时间点损伤灶皮层脑组织中EB含量；应用Westernblot法检测损伤灶脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1的表达水平。结果损伤灶皮层中EB含量在伤后1-6h明显增多，高峰期在3h。Westernblot结果显示损伤后1-6h，ZO-1表达水平较对

2、照组显著降低（p<0.05），3h最明显，24h与对照组无显著性差异。结论脑缺氧缺血时发生脑水肿，可能与ZO-1的表达减少有关。【关键词】创伤性脑损伤血脑屏障ZO-1【Abstract】ObjectiveToexplorethechangesoftightjunctionproteinsZO-1afterTraumaticBrainInjuryMethodsRatswererandomlydividedintoControlgroupandBrain-injurygroup(0.5h、1h、3h、6h、24h)Braininjury

3、animalmodeswereestablishedaccordingtoFeeney’smethod.EvansBlue(EB)measurementincortexwasperformedtodeterminethecontentofEBindamagedcortexatdifferenttimeafterinjury,andtheproteinexpressionofZO-1inmicrovesselendothelialcellswasdeterminedbyWesternblot.ResultsThecontentofEBind

4、amaged7cortexwasincreasedobviouslyatthetimepointof1to6hafterinjury.Theextravasationpeakcoursewasat3hafterinjury.Westernblotrevealedthattheexpressionoftightjunction(TJ)associatedwithproteinZO-1wassignificantlydecreasedatthetimepointof1to6hafterinjury.(P<0.05).and3hwaspr

5、ominent.ComparedwithControlgroup,therewasnosignificantdifferenceinthe24hgroup.ConclusionThedecreasedexpressionofZO-1mayplayanimportantroleintheformationofbrainedemaafterTraumaticBrainInjury.【Keywords】TraumaticbraininjuryBlood-brainbarrierZO-1随着国民经济和交通运输的发展，创伤性脑损伤(Traumati

6、cBrainInjury,TBI)发病率逐年升高，其早期病理改变之一为血脑屏障(bloodbrainbarrier,BBB)通透性增高引起的血管源性脑水肿。紧密连接（tightjunction,TJ）是维持BBB完整性的重要因素，研究表明，紧密连接蛋白-1（zonulaoccluden-1,ZO-1）是第一个被确定的紧密连接相关蛋白，它是连接跨膜蛋白（如occludin7和claudin-5）和细胞骨架蛋白actin的桥梁[1]，是构成TJ的重要组成部分。目前，关于ZO-1在创伤性脑损伤后的动态表达研究甚少，本文旨在探讨大鼠创伤性脑损伤后

7、不同时间点血脑屏障通透性及ZO-1表达水平的变化，以期进一步阐明脑外伤导致的BBB通透性增加的分子机制，同时为临床TBI的治疗提供新的思路。1.材料与方法1.1材料与试剂EB粉末(AMRESCO,美国)，二甲基甲酰胺(AMRESCO,美国)，、鼠抗ZO-1抗体（Chemicon公司）、小鼠抗β-actin单克隆抗体(SantaCruz公司)，山羊抗小鼠辣根过氧化物酶标记的IgG抗体(北京中山生物技术公司)。成年SD大鼠(雄性和雌性各半)，体重200～250g，由沈阳医学院实验动物中心提供。大鼠随机分为6组，分设为对照组、脑损伤组(0.5h

8、、1h、3h、6h、24h)，每组8只。1.2方法1.2.1制作SD大鼠脑挫裂伤模型：参照Feeney’s自由落体致伤法[3]制作大鼠大脑顶叶局灶皮质挫裂伤模型。大鼠术后2～8h均恢复饮食。每