大鼠创伤性脑损伤zo

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1、大鼠创伤性脑损伤ZO【摘要】目的探讨紧密连接蛋白ZO-1在创伤性脑损伤中的变化及意义。方法大鼠随机分为对照组和脑损伤组(0.5h、1h、3h、6h、24h)，参照Feeneys的自由落体致伤法，制作大鼠顶叶局灶皮质挫裂伤模型。应用伊文氏兰(EvansBlue)法测定伤后不同时间点损伤灶皮层脑组织中EB含量；应用ethodsRatslydividedintoControlgroupandBrain-injurygroup(0.5h、1h、3h、6h、24h)Braininjuryanimalmodesethod.EvansBlue(EB)measurementinc

2、ortexedtodeterminethecontentofEBindamagedcortexatdifferenttimeafterinjury,andtheproteinexpressionofZO-1inmicrovesselendothelialcellsinedbyRESCO,美国)，二甲基甲酰胺(AMRESCO,美国)，、鼠抗ZO-1抗体（Chemicon公司）、小鼠抗β-actin单克隆抗体(SantaCruz公司)，山羊抗小鼠辣根过氧化物酶标记的IgG抗体(北京中山生物技术公司)。成年SD大鼠(雄性和雌性各半)，体重200～250g，由沈

3、阳医学院实验动物中心提供。大鼠随机分为6组，分设为对照组、脑损伤组(0.5h、1h、3h、6h、24h)，每组8只。1.2方法1.2.1制作SD大鼠脑挫裂伤模型：参照Feeneys自由落体致伤法[3]制作大鼠大脑顶叶局灶皮质挫裂伤模型。大鼠术后2～8h均恢复饮食。每个时间点8只，对照组8只大鼠未致伤。1.2.2脑外伤大鼠血脑屏障通透性的测定BTB的通透性可用伊文氏兰(Evansblue，EB)的渗出量定量估计。简单的说，大鼠均于处死前1h股静脉注射用生理盐水配制2％EB(2mg/kg)，测定伤后0.5h、1h、3h、6h、24h皮层脑组织中EB的含量。取脑前，经左

4、心室灌注肝素化生理盐水，直至在右心耳处流出无色液体为止。断头后取伤灶周围脑组织并称重，而后放入甲酰胺(1ml/100mg)60℃孵育24h。在分光光度计上测定620nm处的吸光度，根据用一系列稀释度EB的光密度值制作的标准曲线计算染料含量。1.2.3n;标准差(±SD)，组间比较用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1脑外伤对大鼠血脑屏障通透性的影响伊文氏兰试验检测脑外伤后不同时间点(0.5h、1h、3h、6h、24h)血脑屏障通透性的变化，发现不同损伤时间均可使损伤灶皮层组织蓝染，其中3h蓝染区面积最大，而对照组未见蓝染

5、。与对照组(4.20±0.42μg/g)相比，损伤灶皮质中EB含量脑损伤后在1h、3h和6h组显著增加(34.72±3.17μg/g,86.23±6.73μg/g,46.35±4.47μg/g,respcctively,p<0.05)，而在0.5h组(6.78±2.62μg/g)和24h组(5.49±1.86μg/g)无显著性差异。2.2n;0.13)ZO-1有较高的表达，与对照组(2±0.13)相比差异无统计学意义(P＞0.

6、05)；而脑损伤1h后，损伤灶微血管中ZO-1的蛋白表达水平开始降低(1.25±0.12)，（P<0.05），在损伤3h时(0.51±0.12)降低最明显（P<0.01），而后逐渐增加，6h(1.15±0.14)（P<0.05），在24h时(1.87±0.12)基本恢复到对照组的水平，无显著性差异(P＞0.05)。(如图1)所示。(责任编辑：编辑04)图1.Zonulaoccludens-1and-2arecytosolicscaffoldsthatregulatetheassemblyof

7、cellularjunctions.AnnNYAcadSci,2009,1165:113-120[1]FeeneyDM,BoyesonMH,LinnRT,etal.Responsetocorticalinjury:Methodologyandlocaleffectsofcontusionsintherat.BrainRes,1981,211:67-77[2]BernackiJ，Dobroacologicalroleoftheblood-brainbarrier.PharmacolRep,2008,60(5):600-622[3]BallabhP，BraunA，Ne

8、derga