全硫代反义寡核苷酸抑制人膀胱癌ej细胞活性的实验研究

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1、全硫代反义寡核苷酸抑制人膀胱癌Ej细胞活性的实验研究【摘要】目的研究全硫代反义寡核苷酸（PSASODN）对人膀胱癌细胞Ej端粒酶活性及细胞生长的影响，探讨PSASODN在膀胱癌治疗中的价值，为临床治疗膀胱癌提供理论依据。方法将PSASODN转染作用于人膀胱癌细胞Ej中，分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附(ELISA)法检测不同浓度PSASODN对人膀胱癌细胞Ej的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PSASODN作用于人膀胱癌细胞Ej后能显著抑制人膀胱癌细胞Ej的端粒酶活性，抑制癌细胞生长增殖，促进细胞凋亡，而且呈现时间特异性和剂量依赖性，与SOD

2、N转染组及空白对照组进行比较，差异显著(P＜0.05或0.01)。结论PSASODN能抑制人膀胱癌细胞Ej的生长，降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡；抑制端粒酶活性可能成为膀胱癌基因治疗的新靶点。【关键词】全硫代反义寡核苷酸；膀胱癌；端粒酶　　【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofantisensephosphorothioateoligodeoxynucleotides(PSASODN)ontelomeraseactivityandproliferationofbladdercarcinomaEjcell,andexplorethe

3、treatmentvalueofPSASODNforbladdercancer.MethodsPSASODNwastransfectedintobladdercancercelllineEjbyliposomaltransfection.EffectsofdifferentPS10ASODNdensityonproliferationactivityofcellproliferation,cellwithering,activityoftelomeraseofEjwereexaminedbymethylthiazolyltetrazolium(MTT),flowcy

4、tometermethodandELISA.ResultsTelomeraseactivityofEjcells,transfectedwithPSASODN,wassignificantlyinhibited,comparedwiththatofcontrolgroupsandnonsenseoligonucleotide(SODN)transfectedcells(P＜0.05or0.01)，andshowednodifferencebetweenthelattertwogroups(P＞0.05).InhibitoryeffectofPSASODNwasshow

5、edinadoseandtimedependedmanner.TheproliferationofEjcellstransfectedwithASODNundergoingapoptosiswasstatisticallylowerthanthatofcontrolgroups(P＜0.05).ConclusionPSASODNcaninhibitthegrowthofEjCellsanddecreasetelomeraseactivity,causingtherevulsionofcellwithering.Theresultssuggestedthatinhibi

6、tionoftelomeraseactivitywouldbeanewtargettotreatmentforbladdercancer.　　【Keywords】antisensephosphorothioateoligonucleotide；bladdercancer;telomerase10　　膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤。端粒酶抑制剂能够抑制端粒酶的活性,使肿瘤细胞完全失去增殖能力，趋于分化和凋亡，成为研究热点之一。本文拟通过观察针对端粒酶模板设计的全硫代反义寡核苷酸(PSASODN)对人膀胱癌Ej细胞端粒酶活性的影响，为膀胱肿瘤基因治疗临床应用提供新的基因靶

7、点。　　材料与方法　　1.材料人膀胱癌细胞株Ej(上海细胞库)；RPMI1640培养基、胎牛血清(SIGMA公司)；PSASODN序列为5’CTCAGTTAGGGTTAGACA-3’，PSSODN序列为5’CATTTCTTGCTCTCCACG3’，均为全硫代修饰型(上海生工生物工程公司)；脂质体(BeyotimeBiotechnology公司)；半定量端粒酶检测试剂盒(大连泛邦生物公司)；离心机(上海安亭仪器厂)；流式细胞仪(美国Coulter公司)；Biocellhtl型全自动酶标仪(南京华东公司)。　　2.方法