反义硫代寡核苷酸增强细胞毒药物抗乳腺癌活性的体外研究

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1、反义硫代寡核苷酸增强细胞毒药物抗乳腺癌活性的体外研究【摘要】目的研究以HER2mRNA为靶点的反义硫代脱氧寡核苷酸（SODNs）HA6722单用及与紫杉醇合用时对HER2过表达乳腺癌细胞株MDAMB453体外增殖的抑制作用。方法选择HER2过表达的MDAMB453细胞与HER2低表达的MDAMB231细胞，MTT法观察HA6722单用及与紫杉醇合用时对两种肿瘤细胞增殖的影响；以末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果HA6722及紫杉醇单用均可以剂量依赖

2、方式抑制MDAMB453细胞的体外增殖，IC50值分别为47.6±7.9nmol·L1(n=3,mean±s)和19.4±4.1nmol·L-1（n=3,mean±s）。加用低剂量的HA6722可增强紫杉醇对MDAMB453细胞的抑制作用，IC50值由合用前的19.4±4.1nmol·L-1降至13.6±5.2nmol·L-1（n=3，P＜0.05）。联合应用时，在IC50浓度下二者之间的联合指数（CI）为0.81±0.43(n=3)，其对MDAMB453细胞的相互作用表现为正性协同作

3、用。结论反义寡核苷酸HA6722与细胞毒药物紫杉醇合用对HER2过表达乳腺癌细胞的体外增殖抑制具有协同作用。【关键词】反义寡核苷酸乳腺癌HER2mRNA紫杉醇　　0引言　　乳腺癌的化学治疗近年来有了长足的进展，然而，经多线治疗仍复发转移的晚期患者的治疗，仍然十分棘手。探索包括生物靶向治疗在内的新疗法已成为近年研究的热点之一。　　本研究室的前期研究表明，以HER2mRNA为靶点的特异性硫代反义寡核苷酸，可以抑制HER2过表达乳腺癌细胞株增殖活性[1]。本研究拟对既往合成的反义寡核苷酸HA6722单用

4、或与紫杉醇联用时的抗乳腺癌活性进行研究，试图探索乳腺癌治疗新方法。　　1材料与方法　　1.1细胞系及培养　　本研究采用的细胞株有：MDAMB453（HER2过表达），细胞培养所需的培养基为L15（Gibco,BRL），内含10%的胎牛血清（FCS，Hyclone），置37℃、不含CO2的培养箱中培养；MDAMB231（HER2低表达）的体外培养采用RPMI1640（Gibco,BRL）培养基，内含10%的胎牛血清（FCS，Hyclone），置37℃、含体积分数为5%的CO2培养箱中培养传代

5、。当细胞生长至80%～85%融合时用0.25%胰蛋白酶消化，传代和收集细胞。　　1.2硫代反义寡核苷酸的合成及体外脂质体转染　　反义寡核苷酸的靶向HER2mRNA反义寡核苷酸HA6722序列为含20个核苷酸的寡聚核苷酸，其命名原则及合成见　　为了澄清HA6722与紫杉醇协同抗肿瘤作用是否具有细胞选择性，对HER2低表达的乳腺癌细胞株MDAMB231细胞也进行了同样的研究，结果表明，等摩尔浓度的二种药物合用对该细胞株的联合指数在所检测的药物浓度下，波动在（1.13±0.21）～（1.19±0.24

6、）之间，见图3。　　2.3HA6722及紫杉醇乳剂合用对MDAMB453乳腺癌细胞凋亡的影响　　经100nmol·L-1的HA6722及紫杉醇分别单独处理或以50nmol·L-1的HA6722和相同浓度的紫杉醇先后作用MDAMB453细胞后，TUNEL法对细胞凋亡的检测显示，HA6722与紫杉醇合用增强了细胞的凋亡作用（n=3，P＜0.05），见表1。　　3讨论　　业已证明，原癌基因HER2过表达是一个独立的、不良的预后指标，将导致乳腺癌患者对某些化疗方案耐药[6]，生存期缩短[7]。　　图

7、1紫杉醇及反义寡核苷酸HA6722单用时对两种乳腺癌细胞株，MDAMB453及MDAMB231细胞体外增殖的影响（略）　　图3等摩尔浓度的HA6722与紫杉醇合用时对MDAMB231联合指数随生存分数的变化曲线（略）　　图2紫杉醇和HA6722单用或联合时对MDAMB453细胞增殖的影响（略）　　表1HA6722与紫杉醇单用或联合应用对MDAMB453细胞凋亡的影响（略）　　MDAMB453组*P<0.01，与HA6722+紫杉醇组相比；MDAMB231组**P＞0

8、.05，与HA6722+紫杉醇组相比　　紫杉醇是一种新型的抗微管集聚剂，是当前乳腺癌治疗中疗效较高的药物之一。然而，由于绝大部分细胞毒药物存在剂量限制性毒副作用（DLTs），因而单用化疗药物不但无法治愈肿瘤，而且还会产生严重的毒副作用。事实上，一度被认为乳腺癌根治希望所在的大剂量化疗（HDCT）加干细胞支持疗法也并没有达到根治甚至是有效改善乳腺癌患者预后的目的[8]。　　生物靶向治疗近年逐渐成为研究的焦点，以bcl2等基因为靶点的反义药物G3139已在体外及体内研