反义硫代寡核苷酸逆转MRSA耐药性的研究

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1、第四军医大学硕士学位论文反义硫代寡核苷酸逆转MRSA耐药性的研究姓名：扈本荃申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：罗晓星2003.5.1独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德．本八声明斫呈交的论文是我个八在导师指导下进行的研究工作】趸取得lt,5研究成果尽技所知．除了文中特别加以标注和致谢的地方外．论文中不包含其他八已经发表煦撰写过的研究成果不包含本八或他人已申请学泣或其他用途使用过的成果与找一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢申请学拉论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任论文作者蔓各：疆!盈

2、卜奎日期。型保护知识产权声明本八完全了解第四军医大学有关保护知识产权的瑚定．即：研究生在校攻读学位期间论文工1乍的知识产权单j立属第四军医大学本八保证毕业离校后．发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学学校有权保留送乏论文的复印件．允许论文被查闻和借阋：学校可L¨公布论文的全部或部分内孽(保密内容除外)．可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文论文作者鞴盔本签钏强翌哆p眦二吵二址第四军医大学硕士研究生论文MRSAas-0NDsPS．0DNNCCLS英文缩写词对照表(Abbreviation)Methecillin-resistan

3、tStaphlococcusaureusAntisenseoligodeoxyribonucleotidesPhosphorothioatcoligideoxy-nucleotide耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌反义寡聚脱氧核苷酸硫代寡聚脱氧核苷酸NationalCommitteeforClinical美国临床实验室标LaboratoryStandards准化委员会0xacillin苯唑西林CFUColonyformingunit菌落形成单元K-BKirby-BauerPRSP琼脂扩散法敏感实验PenicillinresistantStreptoc

4、occus耐青霉素肺炎链球pneumoniae菌PBPsPenicilin-bindingprotein青霉素结合蛋白第四军医大学硕士研究生论文VRE!罂oml闪hre8i嘲m耐万古霉素肠球菌E玎阳rococcusPCRPolymer豁echaillreaction聚合酶链反应CMComm啦aquired砬ction社区获得感染HIHo@italinfection医院内感染Aspanohn嬲e天冬氨酸激酶第四军医大学硕士研究生论文反义硫代寡核苷酸逆转MRSA耐药性的研究硕士研究生扈本荃导师罗晓星教授中文摘要伴随着抗生素的广泛应用，细菌耐药在当今

5、世界范围内的产生和蔓延已愈演愈重，许多曾经是可治愈的疾病，如细菌感染、败血症、传染性疾病正在成为难以治愈的疾病。耐药细菌金黄色葡萄球菌是耐药性发生率最高的致病菌。WHO发布的金黄色葡萄球菌耐药性监测报告显示，世界范围内对青霉素G耐药的金黄色葡萄球菌株已达90％，其中耐药性更强的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methecillin--resistantStaphylococcusaureR$，MRSA)的发生率已达60％-700／0或更高，医院内MRSA感染患者的死亡率最高可达50％。由于MRSA对所有目．内酰胺类抗生素耐药且呈多药耐药，寻找和研制能

6、有效控制耐药菌的手段和药物已成为当务之急。本课题针对MRSA采用反义技术阻断其耐药基因的表达，逆转MRSA的耐药性。菌株的鉴定从国家耐药性监测中心获取MRSA菌株WHO．2，质控菌株ATCC25923由中国药品生物制品检定所提供。使用MicroscallWalkAway-40全自动微生物鉴定系统对菌株进行种属鉴定；细菌耐药性·3．第四军医大学硕士研究生论文采用琼脂扩散法和琼脂筛选法鉴定；利用PCR扩增技术检测MRSA耐药基因mecRl。鉴定结果：wHO-2为金黄色葡萄球菌，鉴定率id=99．99％；WHO．2在苯唑西林(1u∥片)药敏纸片作用下

7、无抑茵圈，其直径以药敏纸片的直径计算，为6mm：琼脂筛选法鉴定MRSA菌株WHO．2的结果显示，WHO．2含苯唑西林的琼脂培养板表面仍有菌落生长。PCR扩增产物检测到特异性耐药基因序列mecgl。质控菌株的结果说明，本实验中所有的鉴定方法均符合NCCLS标准。提示WHO．2是一株耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌，并携带本研究的目标靶基因mecRl。二反义寡核苷酸的设计和合成在基因库内挑选MRSAmecRl的DNA序列，BLAST软件分析该基因序列，利用RNAstructure计算机程序辅助设计反义寡核苷酸，挑选出三条各项参数均较理想的的反义寡核苷酸，

8、并合成全硫代修饰的反义寡聚脱氧核苷酸。三条反义寡聚脱氧核苷酸的作用位点和序列见表1：表l设计合成的反义脱氧寡核苷酸序列三反义寡核苷酸对MRSA耐药性的