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1、拓扑特肯诱导人口腔上皮癌细胞凋亡的机制：徐强，王枫，李等松，陈长生，徐文，缪珊【关键词】人口腔上皮癌细胞株 【Abstract】AIM:TostudythemechanismofapoptosisofKBcellsinducedbyTopotecan(TPT).METHODS:MTTassayentofTPTfor12,24and48h,agarosegelelectrophoresisofgenomicDNAandfloetry(FCM)inetheapoptosisofTPTtreatedKBcellsand,theapoptosisrateofthecell
2、sicDNAofTPTtreatedKBcellsfor12hshoentations,typicalindexofapoptosisinbiochemistry.Thephosphorylationsofp38increasedgraduallyent(12,24and48h)(n=3,P<0.05).CONCLUSION:TPTinducedapoptosisofKBcellsinvitromayresultfromtheenhancedactivationofp38MAPK. 【Keyg/L的TPT孵育12,24和48h,用MTT法检测TPT对KB细胞
3、增殖的作用；DNA凝胶电泳和流式细胞仪技术检测TPT诱导KB细胞凋亡，APK的表达.结果:TPT处理细胞12,24和48h后,KB细胞的抑制率分别为(24±9)%,(34±7)%和(45±10)%,各组间有显著性差异(P<0.05)；流式细胞仪检测其凋亡率，12h时(11.5±2.8)%，24h(31.2±4.1)%，各组间有显著性差异(P<0.01)；DNA凝胶电泳可见TPT作用12h组DNA碎片化，是典型的细胞凋亡生化指标；TPT处理细胞12,24和48h后,KB细胞的pp38MAPK表达逐渐升高(n=3,P<0.05).结论:TPT可通过pp
4、38MAPK开放表达信号通路诱导体外培养的TPT处理KB细胞凋亡. 【关键词】拓扑特肯；人口腔上皮癌细胞株；磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶38；凋亡 0引言 拓扑特肯(Topotecan,TPT)为9二甲基氨基10羟基喜树，是近年来临床上用于治疗晚期肺癌的新型化疗药物,在美国已被批准用于晚期难治性卵巢癌［1］.目前国内对TPT的研究报道较少,其抗肿瘤作用机制尚未明确.丝裂原活化的蛋白激酶（MAPKs）在将细胞外刺激信号转导至细胞及核内的过程中，通过丝/苏/酪氨酸磷酸化，参与细胞增殖、分化、转化及凋亡等及其重要的生物学反应，其中p38MAPKs主要参与细胞凋亡相关的
5、调控［2］.本实验我们观察了TPT对体外培养KB细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,并研究了MAPK信号转导通路pp38的表达,以初步探讨其诱导KB细胞凋亡的机制，为人口腔上皮癌的治疗提供依据. 1材料和方法 1.1材料 Topotecan购自Gene公司，RPMI1640购自Gibco公司，KB细胞购自上海细胞所，MTT购自Sigma公司，p38一抗、二抗和pp38一抗、二抗及标准分子量蛋白Marker均购自美国SantaCruz公司，化学荧光显迹液化学荧光发光剂购自美国Pierce公司，预染标准分子质量蛋白Marker购自美国BioRad公司；IMAGINGQU
6、ANT数据处理系统由提供. 1.2方法 1.2.1MTT实验检测Topotecan对KB细胞毒作用用含小牛血清100mL/L，青霉素100u/L,链霉素100mg/L的RPMI1640培养基在37℃,50mL/LCO2培养箱中培养KB细胞.0.25mg/L胰酶消化贴壁KB细胞,细胞密度为1×107个/L，于96孔培养板内接种100μL/孔(约800个细胞),培养24h.设对照组，给药组加入含有Topotecan25mg/L的RPMI1640培养基,每孔100μL,平行8个孔，孵育12,24和48h后弃去培养液,每孔加入200μL浓度2g/LMTT培养液培养4h,
7、弃上清,每孔加入150μLDMSO,轻度振荡,酶标仪在490nm条件下测定A值，用空白组调零.细胞抑制率用下式计算.细胞抑制率（%）=A对照组-A实验组〖〗A对照组×100% 1.2.2TT实验结果选取含有Topotecan25mg/L的RPMI1640培养液培养KB细胞12,24和48h后，用冷的PBS洗2次（pH7.4），加入适量预冷的细胞裂解液（TrisHCll50mmol/L,pH7.4,10g/LNP40,1mmol/LEDTA,1mmol/LNa3VO3,1mmol/LNaF,100mg/LPMSF,40ml/L蛋白酶抑制剂），冰浴15min,用吸
