p38磷酸化在卡铂诱导的卵巢上皮癌细胞凋亡中的作用机制

《p38磷酸化在卡铂诱导的卵巢上皮癌细胞凋亡中的作用机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、单位代码10475学号104753140967分类号R73硕士学位论文p38磷酸化在卡铂诱导的卵巢上皮癌细胞凋亡中的作用机制学科、专业：肿瘤学研究方向：肿瘤免疫调节与疾病申请学位类别：医学硕士申请人：韩晓璐指导教师：赵志军教授付杨新教授二〇一七年六月THEMECHANISMOFP38PHOSPHORYLATIONINCARBOPLATIN-INDUCEDAPOPTOSISOFEPITHELIALOVARIANCANCERCELLSADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolo

2、fHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByXiaoluHanSupervisor:Prof.ZhijunZhaoAdjunctProf.YangxinFuJune,2017I摘要背景卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，在中国发病率仅次于宫颈癌和宫体癌，位居第三。因其发病隐匿，早期患者无特异性症状，且缺乏有效的早期诊断措施，约75%的患者确诊时已处于晚期，故死亡率最高。卵巢上皮癌（EOC）约占所

3、有卵巢恶性肿瘤的90%，是女性妇科恶性肿瘤中最致命的。目前治疗卵巢癌的主要方案是细胞减灭术联合以铂类为主的化疗，其中卡铂目前被用作与紫杉醇组合的一线治疗剂。尽管最初的反应比较积极，但大多数晚期EOC患者发生复发和获得性的化学耐药使目前的化疗方案无效，使得5年生存率仍徘徊在20%-30%。研究发现EOC是一种具有多种基因遗传和表观遗传缺陷的异质性疾病，已经对其灭活(缺失，杂合性缺失，突变，启动子甲基化)和激活（扩增，突变和低甲基化）遗传还有表观遗传畸变做了大量研究和记录。发现基因组不稳定性的程度与肿瘤的高等级和晚期

4、阶段程度正相关，而且化学耐药的发生与多种基因表达异常相关，这些异常使细胞内药物浓度、细胞凋亡、DNA修复等多种途径发生改变。研究表明卡铂和顺铂等铂类化疗药物作用于肿瘤细胞时多个信号通路被激活，如细胞周期检查点激酶、p53和MAPK通路，最终导致细胞的调亡。耐药的产生一直是抗癌治疗的一大难题，避免顺铂耐药是卵巢癌治疗的关键，因此迫切需要进一步探究EOC化学耐药的分子机制，以研发出更有效的新型治疗策略。目的验证卡铂诱导的卵巢上皮癌细胞中信号通路的变化，并进一步检测p38信号通路在卡铂诱导的卵巢上皮癌细胞凋亡中的作用。

5、方法本文使用两种卵巢上皮癌细胞系进行实验，分别为实验室常用的永久性配对A2780细胞及直接来源于卵巢上皮癌患者腹水的EOC细胞，且为尽可能的模拟EOC细胞在患者腹水中的生存状态，我们同时对其进行成球状悬浮培养。首先为检测顺铂敏感A2780s和由其衍生的对顺铂耐药的A2780cp细胞中由卡铂诱导的信号通路变化，我们对此配对的细胞统一化进行卡铂处理并进行ProteomeProfilerHumanPhospho-KinaseArray实验，I并通过蛋白质印迹实验验证其磷酸化结果。接下来为检测p38磷酸化在卡铂诱导的卵巢

6、上皮癌细胞凋亡中的作用，我们结合使用p38特异性抑制剂使p38信号通路失活以进行不同的实验分组，来设计细胞毒性实验、蛋白质印迹实验和细胞生长实验。结果1、A2780s和A2780cp细胞中的各种激酶在未处理和卡铂处理两种状态下有不同程度的表达。2、卡铂诱导的p38蛋白激酶磷酸化在A2780s细胞中的表达明显高于A2780cp细胞。3、卡铂顺浓度梯度处理检测配对A2780细胞对卡铂的敏感度，同时证实顺铂耐药A2780cp细胞同样对卡铂耐药。4、在顺铂耐药A2780cp细胞中p38信号通路的激活有助于卡铂诱导的细胞凋

7、亡。5、p38信号通路的激活不影响EOC细胞对卡铂的敏感度。6、抑制p38蛋白激酶的活性提高EOC细胞的存活量。7、抑制p38蛋白激酶的活性提高成球状EOC细胞的存活量。结论1.配对A2780细胞中的多种激酶在未处理和卡铂处理两种状态下有不同程度的表达，证实多种信号通路参与到卡铂诱导的卵巢癌细胞凋亡机制中。2.在顺铂耐药A2780cp细胞中p38磷酸化促进卡铂诱导的细胞凋亡。3.在EOC细胞中，p38磷酸化不影响其对卡铂的敏感度，但p38激酶活性的抑制可提高细胞的存活量。关键词：卵巢上皮癌，化学耐药，卡铂，p38

8、MAPK，磷酸化IIABSTRACTBackgroundOvariancancerisoneofthemostcommongynecologicalmalignancies,inChinaitsrateofincidencejustfollowedbycervicalcanceranduterinecancer,rankingthethird.Becauseofitsoc