温热诱导胃癌细胞凋亡及jnk的调控机制研究

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌大堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：鹊l两签字日期：沙l>年6月I2，日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借

2、阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：导师签名(手写)：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要研究背景：胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤，严重危害人类的身心健康。我国预计每年死于胃癌的患者达16万以上

3、，占癌症死亡人数的23％，其死亡率仍居我国的首位。目前胃癌仍以手术治疗为主，但胃癌的早期诊断率很低，大多数患者一经诊断往往已是晚期而失去手术的机会。而全身化疗是晚期胃癌姑息性治疗的主要手段，但目前胃癌的化疗尚没有理想的“金标准”，且毒副作用大。肿瘤热疗是继手术、放射治疗、化学治疗和生物治疗之后的第5大肿瘤治疗手段。尤其在晚期恶性肿瘤或难治性肿瘤治疗方面，其最大优点是无创或微创，可与放化疗具有协同和增敏作用，并又能减轻放化疗的副反应。热疗在肿瘤综合治疗中的地位及意义受到越来越多的关注。大量研究表明诱导细胞凋亡是温热杀伤肿瘤细胞的主要机理之

4、一，但其机制目前尚不清楚。C．Jun氨基末端激酶(c．JunN．terminalkinase，JNK)是机体应激的主要信号转导通路，能被多种刺激因素激活而介导细胞的凋亡。但也有研究显示JNK有抗细胞凋亡的作用，提示JNK信号在细胞应激反应中具有复杂性、多样性。因此目前认为JNK促凋亡或抗凋亡活性可能与细胞类型、死亡刺激以及其它信号通路活性有关。温热属于一种热应激，在温热应激诱导胃癌细胞凋亡中，是否存在JNK的参与及JNK信号起何种调控作用?国内外尚无相关报道。因此，研究JNK在温热诱导胃癌细胞凋亡中的作用及其机制，可能为胃癌的防治提供一

5、个新的靶点，为临床胃癌防治提供科学依据。目的：1．探讨JNK蛋白在胃癌组织中的表达特点及其与胃癌的临床特征的关系。2．探讨温热对胃癌细胞凋亡的影响。3．探讨温热对胃癌细胞生物学行为的影响。4．探测温热后胃癌细胞的P．JNK以及细胞凋亡相关基因Puma、P53、Bcl-2、Bax、Caspase一3等蛋白表达和烈K、Bax等mRNA表达。5．探讨使用JNK特异性抑制剂SP600125阻断JNK后温热引起细胞凋亡相摘要关基因Puma、P53、Bcl．2、Bax和Caspase．3等蛋白表达和JNK、Bax等mRNA表达变化及其可能的机制。材

6、料和方法：1．研究材料：①临床标本：胃癌标本59例，②胃癌细胞系：MKN45、SGC7901。2．温热细胞模型温度选择：43℃。3．细胞损伤的形态学改变：应用倒置显微镜观察及透射电镜观察。4．细胞活力的检测：采用四唑蓝(MTT)比色试验。5．细胞凋亡的检测：采用Hoechst．33258荧光染色、AO／EB荧光双染色、AnnexinV／PI双染色流式细胞术和TUNEL方法。6．细胞周期的检测：采用AnnexinV／PI双染色流式细胞术方法。7．细胞运动迁移能力的检测：采用细胞划痕愈合实验。8．细胞侵袭能力的检测：采用Transwell实

7、验。9．胃癌组织及细胞的JNK信号通路相关蛋白的检测：采用免疫组织化学PV-9000方法及Westernblotting方法。10．胃癌细胞JNK信号通路相关基因mRNA的检测：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法。11．胃癌细胞JNK信号的调控：采用JNK特异性抑制剂SP600125阻断的方法。结果：1．JNK在人胃癌组织中的表达：JNK在胃癌组织中均有表达，在高、中、低分化胃癌组织中，阳性率分别为92。9％、70。8％和52。4％，呈明显递减趋势(P<0．05)，高分化胃癌的JNK表达显著高于低分化胃癌(P<0．01)，但JNK

8、与年龄、性别、肿块大小、PTNM分期及淋巴结转移无关(均P>0．05)。2．温热对胃癌细胞凋亡的影响：(1)倒置显微镜检测结果表明，温热0．5h、lh、2h及3h后两株胃癌细胞(SGC7901和MKN45)