flavokawain a诱导胃癌sgc-7901细胞凋亡的机制研究

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1、ByRongPangSupervisor：Prof．ZhenzhongZhangXiaXuPharmaceuticalAnalysisSchoolofPharmaceuticalscienceMay2012学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其

2、他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：≯位年3"-月，苫日1．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．～————————————摘要植物提取物FlavokawainA是从胡椒科植物卡瓦胡椒(P

3、ipermethysticumForst)的干燥根中提取的活性成分，是一种新型抗癌化合物，但作用机制尚不明确。有报道显示，当今来源于植物的抗癌药物和抗炎免疫药物占新药的60％以上，从植物中提取抗癌化合物已经成为实验研究的热点。本实验研究FlavokawainA抑制人胃癌SGC．7901细胞生长、诱导细胞凋亡的机制，主要研究内容如下：1FlavokawainA对胃癌SGC．7901细胞增殖及凋亡的影响通过MTT法，检测SGC．7901细胞经过系列浓度(O．781，1．56，3．13，6．25，12．5“酌

4、m)FlavokawainA作用24，48和72h后细胞的存活和生长状态，计算其IC50值。在倒置显微镜下观察FlavokawainA作用前后，SGC．7901细胞在形态学特征上的变化。采用PI单染法观察FlavokawainA对细胞周期的影响，通过流式细胞仪定量测定细胞周期分布的变化。FlavokawainA对细胞凋亡的影响，则是采用ArmexinV-FITC／PI双染法，通过流式细胞仪测定分析细胞凋亡率的变化。实验数据显示，SGC．7901细胞经过不同浓度(0．781，1．56，3．13，6．25，

5、12．5p∥础)FlavokawainA作用后，于24，48和72h后检测细胞抑制率，计算得出24，48和72h的IC50值分别为8．55，5．42，3．33“g／ml。细胞周期分布测定结果比较得出，FlavokawainA作用于SGC．7901细胞24h后，与溶剂对照组相比实验组细胞处于G2／M期的数量明显升高。细胞凋亡结果显示，早期凋亡率和晚期凋亡率均有不同程度的增加，6．25“g／mlFlavokawainA作用于细胞48h后，早晚期凋亡率分别为5．90％和5．44％。12．5“幽：nlFlavo

6、kawainA作用于细胞48h后，早晚期凋亡率分别为14．37％和20．70％。2FlavokawainA对caspase．9，caspase．3基因转录表达的影响配制适宜浓度FlavokawainA培养基溶液，加入SGC．7901细胞培养，作用时间点到后采用Trizol法提取SGC．7901细胞中的总RNA，通过实时荧光定量PCR法检测caspase．9，caspase．3基因转录表达情况，与溶剂对照组进行比较，得出caspase．9，caspase．3基因转录水平存在不同程度的上调。3Flavoka

7、wainA对caspase．9，caspase．3蛋白表达的影响配制适宜浓度FlavokawainA培养基溶液，加入SGC．7901细胞培养，作用I摘要时间点到后采用WesternBlot法检测caspase．9，casp2Lse．3蛋白的表达情况，并与溶剂对照组进行比较。所得数据通过软件分析得出，caspaSe．9蛋白表达水平上调，casp豁e．3被激活。4FlavokawainA的细胞动力学研究配制适宜浓度FlavokawainA化合物培养基溶液，加入SGC．7901细胞培养，继续分别培养15，30

8、，60，120，240rain，时间点到后，经过样品前处理过程后采用高效液相色谱法对化合物进行定量分析。实验数据显示，FlavokawainA作用后，SGC．7901细胞在1--2h内对化合物的摄取量达到最大值。5总结本实验数据结果表明，FlavokawainA对SGC．7901细胞生长具有明显的抑制作用，抑制率随着化合物浓度及作用时间的增加而增大。经过FlavokawainA化合物作用后，对SGC．7901细胞的形态造成了明显的改变。通过